导图社区 氨基酸的呈色反应
氨基酸的呈色反应是鉴定氨基酸的重要方法之一,是生物化学实验课程的重要实验,有助于大家对氨基酸性质的更好理解。
熔点的测定是有机化学一次比较简单的实验,虽然简单但也非常重要,对于大家了解物质熔点变化有更清晰的认识,通过一个简单的思维导图,能够帮助大家理清实验的步骤,加深对实验结果的分析。
通过自己动手实验,染色观察根霉、曲霉、青霉、放线菌与酵母菌的形态,并用文字描述观察到的,这样图文并茂,能更好的总结归纳这些菌的总体的特征。
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蛋白质和氨基酸的 呈色反应
1. 实验目的
1.1. 1、了解蛋白质和氨基酸的呈色反应原理 2、学习几种常用的鉴定蛋白质和氨基酸的方法。 3、了解呈色反应在定性和定量分析中的应用 。
2. 双缩脲反应
I. 实验原理
I.1.
II. 实验试剂
II.1. 尿素 10%氢氧化钠溶液 1%硫酸铜溶液 10%蛋白质溶液
III. 操作步骤
III.1. 取少量(小半勺)尿素结晶,放在干燥试管中。用微火加热使尿素熔化, 尿素放出氮,熔化的尿素开始硬化时,停止加热,形成双缩脲,冷却后, 加10%氢氧化钠溶液约1ml,振荡混匀,再加1%硫酸铜溶液1滴,再振荡观察。 加时要避免过量硫酸铜。
III.2. 向另一试管加蛋白质溶液约0.5ml和10%氢氧化钠溶液约1ml,摇匀,再加1%硫酸铜溶液 1~2滴,随加随摇,观察。
IV. 实验结果
IV.1. 双缩脲试剂试管无明显颜色反应
IV.2. 蛋白质溶液试管呈现蓝紫色
IV.2.1.
3. 茚三酮反应
A. 实验原理
A.1.
B. 实验试剂
B.1. 蛋白质溶液 (新鲜蛋清:水=1:9)100ml
B.2. 0.5%甘氨酸溶液
B.3. 0.1%三酮水溶液
B.4. 0.1%三酮﹣乙醇溶液
C. 操作步骤
C.1. 取2支试管分别加入蛋白质溶液和甘氨酸溶液1ml,再各加0.5ml0.1%茆三酮水溶液, 混匀,在沸水浴中加热1~2分钟,观察颜色由粉色变紫色再变蓝。
C.2. 在一小块滤纸上滴一滴0.5%甘氨酸溶液,风干后,再在原处滴一滴0.1%茆三酮乙醇溶液, 在微火旁烘干显色,观察紫红色斑点的出现。
D. 实验结果
D.1. 两只试管颜色由粉色变紫色再变蓝色
D.2. 滤纸上出现红色斑点
D.2.1.
4. 黄色反应
4.1. 实验原理
4.1.1.
4.2. 实验试剂
4.2.1. 鸡蛋清溶液 头发 指甲 0.5%苯酚溶液 浓硝酸 0.3%色氨酸溶液 0.3%酪氨酸溶液 10%氢氧化钠溶液
4.3. 操作步骤
4.3.1. 向6个试管中分别按下表加入试剂,观察各管 出现的现象,有的试管反应慢可略放置或用微火 加热,待各管出现黄色后,于室温下逐滴加入 10%氢氧化钠溶液至碱性,观察颜色变化。
4.4. 实验结果
4.4.1. 各试管都出现黄色加深的情况,变成橙黄色
5. 乙醛酸反应
5.1. 实验原理
5.1.1.
5.2. 实验试剂
5.2.1. 蛋白质溶液鸡蛋清:水=1:20 冰醋酸 浓硫酸
5.3. 操作步骤
5.3.1. 向试管中加数滴蛋白质溶液,再加冰醋酸约1ml,倾斜试管, 谨慎地沿着管壁加浓硫酸( A , R ,)约1ml,使其重叠,勿使两者混合。 静置后,观察在两液界面上出现的红紫色环, 于水浴中微热,可帮助颜色形成。
5.3.2. 用20%白明胶作乙醛酸反应。白明胶分子中无色氨 酸所以不呈此反应。
5.4. 实验结果
5.4.1. 两液面交界处出现红紫色环
6. 考马斯亮蓝反应
6.1. 实验原理
6.1.1. 考马斯亮蓝G250具有红色和蓝色两种色调。在酸性溶液中,其以游离存在呈棕红色;当它与蛋白质通过疏水作用结合后变为蓝色。 它染色灵敏度高,比氨基黑高3倍。反应速度快,约在2分钟左右时间达到平衡,在室温一小时内稳定。在0.01~1.0mg蛋白质范围内,蛋白质浓度与A595nm值成正比。所以常用来测定蛋白质含量。
6.2. 实验试剂
6.2.1. 蛋白质溶液(鸡蛋清:水=1:20)5 ml
6.2.2. 考马斯亮蓝染液300 ml 考马斯亮蓝G250100mg溶于50 ml 95%乙醇中,加100 ml 85%磷酸混匀, 配成原液。临用前取原液15 ml ,加蒸馏水至100 ml ,用粗滤纸过滤后, 最终浓度为0.01%。
6.3. 操作步骤
6.3.1. 取2支试管,按下表操作
6.4. 实验结果
6.4.1. 试管一无明显颜色变化,试管二由棕红色变为蓝色
6.4.1.1. 子主题
6.4.1.1.1.
各实验现象照片 取自在校同学的实验拍摄