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体外分析技术
分类
放射免疫分析 RIA
🌟基本原理
竞争性抑制结合反应:在体外条件下,过量的放射性核素标记抗原(*Ag)和非标记抗原(Ag)同时与限量的特异性抗体(Ab)进行竞争抑制性免疫结合反应。
标准曲线的制备定量基础
定量基础:*AgAb的量( 结合率B% )与Ag 的量之间存在竞争抑制数量关系。
二次函数关系
用标准竞争抑制曲线(标准曲线)来表示
定义:以放射性同位素标记的抗原为示踪剂,以抗原和抗体的结合反应为基础,在试管内进行的超微量生物活性物质的定量检测技术。
基本试剂
抗体:(三高):亲和力、特异性、滴度
标记抗原: 高的比活度(KBq/ug) 高放化纯度 >95% 保持原有抗原的特性 半衰期足够长
非标记标准抗原(标准品):呈梯度的一系列已知浓度的标准抗原
质控品
分离沉淀剂
RIA的分离
分离要求: ◼ 分离完全、快速。 ◼ 不影响免疫反应的平衡。 ◼ 不受环境因素(温度、PH值等)或其他试剂的影响。 ◼ 操作简便,重复性好 ◼ 来源方便、价格低廉
分离方法
质量控制
目的:保证分析误差控制在可接受的范围
室内质量控制:评价自身检测结果的精密度
实验室间质量评价:考察实验室的结果的可准确性
操作基本步骤
小结:灵敏度高,特异性好,定量精确,方法学稳定,方法操作相对简便
免疫放射分析 IRMA
基本原理
在体外条件下,利用Ag与过量*Ab的非竞争性结合反应,通过测定放射性复合物的量计算待测Ag浓度的超微量分析技术
应用特点
灵敏度高:比RIA高出10~100倍。 特异性好:使用单克隆抗体,特异性一般比较高。 加样误差小:抗体是过量的,加样误差来自抗原一个环节。
不足:需要特殊分离方法,对半抗原不适应,需大量*Ab,昂贵
IRMA和RIA区别
非放射性标记免疫分析技术
化学发光免疫分析技术-CLIA
时间分辨荧光免疫分析技术-TRFIA
特点: 1、灵敏度更高 2、测量线性范围宽:RIA由于放射性限制了其范围。 3、光信号持续时间长:简化了实验操作; 4、无辐射污染
标记免疫检测技术的临床应用
eg:甲功五项
病例
患者 女,48岁 主诉:近半年心慌,多汗,怕热,体重下降。 家族史:家族中有三个姑姑均在40岁左右发现甲亢。 查体:皮肤潮湿,双手细颤,心率110次/min,律齐。甲状 腺II°肿大,质地中等,无压痛。颈部淋巴结未及;