体外分析技术

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体外分析技术

• 分类
• 放射免疫分析 RIA
  • 🌟基本原理
    • 竞争性抑制结合反应:在体外条件下，过量的放射性核素标记抗原(*Ag)和非标记抗原(Ag)同时与限量的特异性抗体(Ab)进行竞争抑制性免疫结合反应。
    • 标准曲线的制备定量基础
      • 定量基础:*AgAb的量( 结合率B% )与Ag 的量之间存在竞争抑制数量关系。
      • 二次函数关系
      • 用标准竞争抑制曲线(标准曲线)来表示
  • 定义：以放射性同位素标记的抗原为示踪剂，以抗原和抗体的结合反应为基础，在试管内进行的超微量生物活性物质的定量检测技术。
  • 基本试剂
    • 抗体：(三高):亲和力、特异性、滴度
    • 标记抗原： 高的比活度(KBq/ug) 高放化纯度 >95% 保持原有抗原的特性 半衰期足够长
    • 非标记标准抗原（标准品）：呈梯度的一系列已知浓度的标准抗原
    • 质控品
    • 分离沉淀剂
  • RIA的分离
    • 分离要求: ◼ 分离完全、快速。 ◼ 不影响免疫反应的平衡。 ◼ 不受环境因素(温度、PH值等)或其他试剂的影响。 ◼ 操作简便，重复性好 ◼ 来源方便、价格低廉
    • 分离方法
  • 质量控制
    • 目的:保证分析误差控制在可接受的范围
    • 室内质量控制：评价自身检测结果的精密度
    • 实验室间质量评价：考察实验室的结果的可准确性
  • 操作基本步骤
  • 小结：灵敏度高，特异性好，定量精确，方法学稳定，方法操作相对简便
• 免疫放射分析 IRMA
  • 基本原理
    • 在体外条件下，利用Ag与过量*Ab的非竞争性结合反应，通过测定放射性复合物的量计算待测Ag浓度的超微量分析技术
  • 应用特点
    • 灵敏度高:比RIA高出10~100倍。 特异性好:使用单克隆抗体，特异性一般比较高。 加样误差小:抗体是过量的，加样误差来自抗原一个环节。
    • 不足:需要特殊分离方法，对半抗原不适应，需大量*Ab，昂贵
• IRMA和RIA区别
• 非放射性标记免疫分析技术
  • 化学发光免疫分析技术-CLIA
  • 时间分辨荧光免疫分析技术-TRFIA
  • 特点： 1、灵敏度更高 2、测量线性范围宽:RIA由于放射性限制了其范围。 3、光信号持续时间长:简化了实验操作; 4、无辐射污染
• 标记免疫检测技术的临床应用
  • eg：甲功五项
• 病例
  • 患者 女，48岁 主诉:近半年心慌，多汗，怕热，体重下降。 家族史:家族中有三个姑姑均在40岁左右发现甲亢。 查体:皮肤潮湿，双手细颤，心率110次/min，律齐。甲状 腺II°肿大，质地中等，无压痛。颈部淋巴结未及;