诊断学·实验诊断·临床常见病原体检测

诊断学的·临床常见病原体检测章节的标本采集运送和原则部分的知识点归纳，本专业和有兴趣的朋友们不要错过。

诊断学·临床常见病原体检测·标本的采集运送、实验室评价和检查方法

• 标本采集和运送
  • 血液
    • 时间
      • 疑为菌血症、败血症、脓毒血症
        • 发热初期、寒战时、发热高峰到来前0.5~1h
      • 已应用抗菌药物治疗者
        • 下次用药前
    • 方法
      • 三步消毒法（皮肤消毒）
        • 消毒范围以穿刺点为中心，直径 5cm
        • 第一步
          • 70% 乙醇擦拭皮肤30s
        • 第二步
          • 1~2% 碘酊1min，或0.5%碘伏1~1.5min
        • 第三步
          • 70% 乙醇擦拭皮肤30s
      • 肘静脉穿刺采血
        • 推荐至少采集两个不同部位
        • 成人10~20ml/次（需氧瓶、厌氧瓶各一瓶）
        • 婴儿和儿童1~5ml（两个儿童瓶）
        • 已应用抗菌药物的患者，建议使用含有能吸附抗菌药物活性物质的培养瓶
  • 尿液
    • 方法
      • 女性
        • 采样时用肥皂水或碘伏清洗外阴，再收集中段尿约10~20ml
      • 男性
        • 清洗阴茎头后，留取中段尿
    • 原则
      • 培养厌氧菌，应膀胱穿刺收集尿液，用无菌厌氧容器运送
      • 排尿困难者可导尿（插入导管后，将尿弃掉15ml后再留取）
      • 尿液中不要加入防腐剂
  • 粪便
    • 方法
      • 取含脓、血或黏液的粪便置于清洁容器中送检
      • 直肠拭子，将拭子置于有保存液的试管内送检
        • 适用于排便困难、婴儿
    • 原则
      • 根据细菌种类不同，选用合适的运送培养液以提高阳性检出率
      • 用于厌氧菌培养的标本应尽量避免与空气接触，最好在床边接种
      • 一次粪便培养阴性不能排除胃肠道病原菌的存在
        • 传染性腹泻需送检三次（非同一天）粪便进行细菌培养
      • 为避免带菌病人传染他人，应在不同时间间隔期间≥3次连续培养阴性才能出院
  • 呼吸道标本
    • 类型
      • 鼻咽拭子、痰 、通过气管收集的标本
    • 作用
      • 鼻咽拭子和鼻咽洗液——可供鼻病毒、呼吸道合胞病毒、肺炎衣原体、溶血性链球菌等的病原学诊断
    • 原则
      • 上呼吸道标本存在正常菌群，在病原学诊断时需注意
      • 真菌培养时，最好同时做涂片镜检和普通细菌培养
      • 合格的痰标本——低倍镜视野中鳞状上皮细胞≤10个、白细胞≥25个
  • 脑脊液与其他无菌体液
    • 原则
      • 采集的脑脊液应立即保温送检或床边接种
      • 腹膜透析液标本含菌量非常低，采集≥50ml
      • 积液（胸腹腔、心包）标本含菌量少，宜采集较大量标本送检
  • 眼、耳部标本
    • 方法
      • 运送拭子采样
        • 适用于外耳道疖、中耳炎患者
      • 局麻后，取角膜刮屑
      • 鼓膜穿刺
        • 适用于新生儿、老年人
  • 生殖道标本
    • 原则
      • 根据不同疾病的特征及检验项目采集不同标本
      • 除淋病奈瑟菌保温送检外，所有标本收集后4°C保存直至培养，若标本>24h，则需-70℃冻存
    • 经典
      • 性传播性疾病
        • 尿道口分泌物 、 外阴糜烂面病灶边缘分泌物、阴道宫颈口分泌物、前列腺液
      • 生殖道疱疹
        • 疱疹液
      • 盆腔脓肿
        • 直肠子宫凹陷处穿刺取脓
  • 创伤、组织和脓肿标本
    • 原则
      • 对损伤范围较大的创伤，应从不同部位采集多份标本
      • 采集部位应首先清除污物、消毒皮肤，防止皮肤表面污染菌混入标本而影响检测
      • 标本较小应加无菌等渗盐水以防干燥
    • 经典
      • 开放性脓肿
        • 无菌拭子，采集病灶边缘和深部分泌物，或组织标本
      • 封闭性脓肿
        • 无菌干燥注射器，穿刺抽取脓肿边缘及底部的脓汁
      • 疑厌氧菌感染
        • 取脓液后立即排净注射器内空气，针头插入无菌橡皮塞送检
  • 血清
    • 作用
      • 检测病人产生的特异性抗体效价，辅助诊断感染性疾病
    • 方法
      • 采集血液，置于无菌试管中，自然凝固
      • 血块收缩后，吸取血清，56°C、30min（灭活补体成分）
      • 灭活血清保存于-20℃
• 标本的实验室质量评估标准
  • 标本必须注明姓名、年龄、性别、采集日期、临床诊断、检验项目等基本信息，并有病程及治疗情况的说明
    • 无标签的标本 ， 不接收
  • 仔细核对标本采集时间、送检时间
    • 延误送检的标本，一般不接收
      • 用于细菌学检验的标本，应在2h内送至实验室并处理
      • 特殊标本（脑脊液），应立即送检并处理
      • 病毒检测标本，可在4℃存放2~3d
  • 对于非侵害性方式获取的不合格标本，应联系临床要求重新采集送检 对于侵害性操作获取的不合格标本，需与采集此标本的医生协商之后，方可接收检测，并要在报告上注明情况，将其记录存档
  • 检查送检容器是否完整，若拒收需告知送检者并要求重新送检
    • 容器有破损或渗漏等情况，不予接收
  • 标本储存、运送方式不当，不予接收
    • 特别应注意厌氧培养标本、某些对环境温度敏感的病原体的送检方式，需联系送检者，告知实验要求，说明其不同之处
  • 明显被污染的标本不予接收
  • 标本量明显不足的标本，不予接收
    • 标本量不够会导致假阴性结果
    • 若标本不易取得， 量少的标本要在采集后的15~30min内送检
  • 同一天申请作同一实验的重复送检标本（血培养除外），不接收，并与送检者联系并说明标本重复不予处理
  • 对于烈性传染病标本的采集和运送应严格执行相关规定，要有完善的防护措施，按规定包裹及冷藏，并附有详细的采样及送检记录，由专人护送
• 检查方法
  • 直接显微镜检测
    • 作用
      • 无菌体液的直接镜检，对病原体诊断有一定意义
      • 正常菌群寄居部位的分泌物涂片镜检，可提示进一步检查所需的步骤、方法和分离培养基
    • 方法
      • 涂片染色显微镜检查
        • 方法
          • 将标本直接涂片、干燥、固定后染色
          • 离心浓缩集菌涂片，染色
        • 作用
          • 观察细菌的形态、染色性、包涵体
      • 涂片不染色显微镜检查
        • 方法
          • 悬滴法、压滴法、湿式涂片
          • 暗视野显微镜、相差显微镜
        • 作用
          • 观察病原菌的生长、运动方式
          • 观察螺旋体的形态、运动
      • 荧光显微镜检查和免疫电镜检查
        • 荧光显微镜检查
          • 直接检出经荧光染色和的标本
            • 结核分枝杆菌、麻风分枝杆菌、白喉棒状杆菌等
        • 免疫电镜检查
          • 确诊某些病毒感染
            • 轮状病毒（车轮状的双层衣壳病毒颗粒）
  • 病原体特异性抗原检测
    • 方法
      • 免疫荧光技术、酶联免疫技术、化学发光技术、胶乳凝集试验、对流免疫电泳等
  • 病原体核酸检测
  • 病原体的分离培养和鉴定
    • 细菌和真菌感染性疾病病原体的分离培养
    • 不能人工培养的病原体感染性疾病
  • 血清学试验
    • 定义
      • 用已知病原体的抗原检测病人血清中相应抗体以诊断感染性疾病
    • 作用
      • 现症诊断、疾病追溯性调查
      • 不适于疾病的早期诊断
  • 细菌毒素检测
    • 内毒素
      • 定义
        • G-菌细胞壁上的一种LPS和蛋白复合物
      • 方法
        • 鲎试验（0.0005~0.005µg/ml）
          • 检测内毒素最敏感的方法
          • 广泛应用于革兰阴性菌感染的快速诊断，可对血液、尿液、脑脊液进行直接检查
    • 外毒素
      • 方法
        • 生物学法（体内、外毒力试验）、免疫血清法、基因探针技术、自动化仪器检测法
          • 生物学法
            • 操作复杂，且不易获得敏感动物
            • 只在发现新的毒素的特殊情况下采用
          • 免疫血清法
            • 快速、灵敏
            • 用于大样品量的筛选
          • 基因探针技术
            • 可检测单个菌落产生毒素的性质
          • 自动化检测仪
            • 检测通量高