药物分析-药物鉴别试验

药物分析-药物鉴别试验是根据药物的分子结构特征，采用物理化学或者生物学方法判断或鉴别药物的真伪。

药物鉴别试验

• 概述
  • 目的
    • 根据药物的分子结构特征，采用物理化学或者生物学方法判断或鉴别药物的真伪。
  • 适用性
    • 证实是否为标示的药物，并非确证鉴定
• 鉴别试验的项目
  • 性状
    • 外观
      • 色泽及外表感观：聚集状态、晶型、色泽、臭、味（引湿性，遇光渐变色）
    • 溶解度
      • 反映药品的纯度，晶型或粒度 表观溶解度，各成分溶解度的加权和 描述：极易溶解，易溶，溶解，略溶，微溶，极微溶解，几乎不溶或不溶 测定法：25℃＋－2℃，5min振摇30s，共30min
    • 物理常数
      • 熔点
        • 熔融时分解温度/一段温度（自初融到全熔）
          • 初熔
            • 局部液化，出现明显液滴
          • 全熔
            • 全部液化
        • 三种测定方法
          • 第一法，（易粉碎固体样品） 报告初熔和全熔
            • 样品熔融且不分解，低于熔点低限10℃ 升温速度1.0-1.5℃/min 样品熔融同时分解，2.5-3.0℃/min
            • 传温液加热法
            • 电热块空气加热法
            • 一端熔封
          • 第二法，（类似凡士林物质）
            • 两端开口，吸入样品，冷冻凝固测定 升温速率＜＝0.5℃/min
          • 第三法，（测定凡士林或其他类似物质）
      • 比旋度
        • 反映手性药物特性及其纯度的主要指标 钠灯的D线（589.3nm）或汞灯 一定λ和T，1dm,1ml,1g
      • 吸收系数
        • 一定波长，温度，溶剂，单位浓度单位液层厚度的吸收度
        • 表示方式
          • 摩尔吸收系数
          • 百分吸收系数——1mol/L，1cm的E(1%-1cm) 考察原料药质量，药物制剂紫外分光光度法测定含量的依据
  • 一般鉴别试验 （证实一类药物）
    • 化学反应→单一化学药物（混合物，有干扰物不适用） 无机，阴、阳离子特殊反应 有机，官能团反应
    • 有机氟化物
      • 有机氟化物→氧瓶燃烧法（破坏）→碱性溶液（吸收）→无机氟化物+茜素氟蓝、硝酸亚铈（pH4.3）→蓝紫色络合物
    • 有机酸盐
      • 水杨酸盐
        • 显色反应： 水杨酸+三氯化铁（中性/弱酸性）→配位化合物（中性红色/弱酸性紫色）
        • 沉淀和溶解反应： 水杨酸+稀盐酸→水杨酸沉淀（白色） 水杨酸沉淀+醋酸铵试液→溶解
      • 酒石酸盐
        • 银镜反应： 酒石酸盐（中性）+氨制硝酸银（Ag(NH3)2OH）→水浴加热→银镜（试管内壁）
    • 芳香第一胺类
      • 芳香胺+稀盐酸/亚硝酸钠→叠氮+脲→振荡→滴加碱性β-萘酚试液→沉淀（粉红到猩红色）
    • 托烷生物碱类
      • Vitali反应： （托烷类→水解→）莨菪酸→发烟硝酸，加热→三硝基衍生物（黄色残渣）→乙醇湿润，+KOH（固体一粒）→深紫色
    • 无机金属盐
      • 焰色反应：铂丝，盐酸润湿，无色火焰 钠（黄），钾（紫），钙（砖红），钡（黄绿，绿色玻璃显蓝色）
      • 铵盐+氢氧化钠（过量）→加热分解→氨气（氨臭） 湿润红色石蕊试纸→蓝色 硝酸汞试液湿润的滤纸→黑色
    • 无机酸很
      • 氯化物
        • （稀硝酸的酸性环境）+硝酸银试液（滴加，AgNO3）→白色凝乳状沉淀 AgCl+氨试液→溶解→+HNO3酸化→↓ （鉴别前加氨试液取滤液可除生物碱/有机碱）
        • +MnO2（等量）→硫酸湿润，加热→Cl2↑ Cl2+湿润碘化钾试纸→蓝色
      • 硫酸盐
        • +BaCl2→白色↓（盐酸，硝酸不溶）
        • +醋酸铅→白色↓（醋酸铵试液/氢氧化钠溶解）
        • （区别硫酸盐和硫代硫酸盐）+盐酸→无沉淀
      • 硝酸盐
        • （小心混合）硝酸盐+硫酸（等量）→冷却→沿管壁加硫酸亚铁→两液层（接界面呈棕色）
        • 硝酸盐+硫酸+铜丝/铜屑→加热→红棕色蒸气
        • （区别硝酸盐和亚硝酸盐）硝酸盐+高锰酸钾→紫色不褪
  • 专属鉴别试验 （验证某一种药物）
• 鉴别方法
  • 化学鉴别法
    • 呈色反应鉴别法
      • 酚羟基三氯化铁呈色反应， 芳香第一胺的重氮化偶合反应， 托烷生物碱类的Vitali反应， 肾上腺皮质激素类的四氮唑反应， 含碳基结构的苯肼反应， 氨基酸及氨基糖苷类糖苷类的印三酮反应， 氨基醇结构的双缩尿反应。
      • 三氯化铁呈色反应（酚羟基）
      • 异羟肟酸铁反应 （芳酸/酯/酰胺）
      • 茚三酮呈色反应 （氨基糖单元，AA）
    • 沉淀生成反应鉴别法
      • 重金属离子如银
    • 荧光反应鉴别法
      • 药物本身（可见光下）
      • 药物加硫酸（可见光下）
      • 药物和溴（可见光下）
      • 药物和间苯二酚或其他
    • 气体生成反应鉴别法
      • 胺/铵类、酰脲类、酰胺类：强碱处理，加热→氨气↑
      • 硫：强酸处理，加热→H2D↑
      • 碘：直火加热→紫色碘蒸气↑
      • 醋酸酯/乙胺类：硫酸水解→加乙醇→醋酸乙酯香味
    • 使试剂褪色的鉴别法
    • 测定生成物的熔点（极少）
  • 光谱鉴别法
    • 紫外光谱鉴别法
    • 红外光谱鉴别法
    • 近红外光谱法
    • 原子吸收法
    • 核磁共振法
    • 质谱鉴别法
    • 粉末X射线衍射法
  • 色谱鉴别法
    • TLC薄层色谱鉴别法
    • HPLC高效液相色谱鉴别法 GC气相色谱鉴别法
      • 供试品和对照品，保留时间
      • 要求，流动相与固定相匹配→保留时间重现性
  • 显微鉴别法
  • 生物学法
    • 技术：药效学，分子生物学 应用：鉴别抗生素、生化药物及中药
    • 分类
      • 生物效应鉴别法
      • 基因鉴别法
      • （按目的和对象：免疫鉴别法、细胞生物学鉴别法、生物效价测定法、纯指标测定法、DNA遗传标记鉴定鉴别法、mRNA差异显示鉴别法。）
  • 指纹图谱与特征图谱鉴别法
    • 中药指纹图谱
      • 目的：提现中药整体特征
      • 实践：将中药内在物质特性转化为常规数据信息
      • 建立过程：中药指纹图谱分析方法的建立、指纹图谱方法认证、方法验证、数据处理和分析
      • 分类
        • （按来源）中药材、饮片、提取物或中间体、成方制剂指纹图谱 中药材、饮片及中间体→生产的内部控制，质量调整以及质量相关性考察。
        • （按获取方面）色谱，光谱及其他 色谱方法首选
    • 特征图谱
      • 专一性，有效成分的特征峰谱图
• 影响因素/鉴别试验的条件
  • 被测物浓度——浓度直接影响沉淀、颜色及光学参数
  • 试剂的用量
  • 溶液的温度——反应速度和生成物分解
  • pH——反应活化状态和生成物稳定状态
  • 反应时间
    • 有机化合物，慢，共价键断裂和形成 无机化合物，离子反应
  • 干扰物质
• 鉴别方法的验证
  • 专属性验证
    • 每种方法都有局限，一般两种以上
  • 耐用性验证
    • 测定条件有小的变动→不影响测定结果