核酸的性质及研究方法

根据大学本科生物化学教科书整理，核酸的性质及研究方法详见如下。

核酸的性质 及研究方法

• 理化性质
  • 紫外吸收
  • 酸碱解离
  • 沉淀(无水乙醇）
  • 变形、复性、杂交
    • 变性
      • 核酸受到加热、极端的pH或离子强度降低等因素或特殊的化学试剂的作用，双螺旋区氢键锻炼，变成单链的过程。不涉及共价键断裂
      • 现象
        • 紫外吸收↑（增色效应）
        • 浮力、密度↑
        • 黏度↓
        • 生物活性不变/降低/丧失
      • Tm（溶解温度）
        • DNA变形发生在一个很窄的温度范围内，通常把热变形过程中A260达到最大值的一半时的温度成为该DNA的溶解温度，用Tm表示
        • （G+C）↑ Tm↑
          • 测定Tm值可推算剪辑组成及判断DNA纯度
    • 复性
      • 热变性DNA一般经过缓慢冷却后即可复性，此过程被成为退火
        • 减色效应
      • 影响因素
        • 温度
        • 离子强度
        • DNA浓度
        • DNA序列的复杂度
  • 水解
    • 酸水解
      • 糖苷键、磷酸二酯键对酸的敏感度：糖苷>磷酸酯；嘌呤糖苷>嘧啶糖苷
    • 碱水解
      • RNA的磷酸二酯键对碱敏感
        • 完成任务迅速降解
      • DNA对碱的作用并不敏感
        • 作为遗传物质要稳定
    • 酶促水解
• 分离、纯化、定量
  • 提取
  • 电泳
  • 离心
  • 层析
  • 纯度检测、定量
  • 定糖法、定磷法、比色法等
• 一级结构测定
  • DNA
    • Sanger的末端终止法、双脱氧法
      • av18254755
    • Maxam和Gilbert的化学断裂法
    • 焦磷酸测序与深度测序
  • RNA
    • • 1.逆转录酶将RNA转录成cDNA
      • 2.末端终止法测定
    • • 1.化学或/和酶学对放射性同位素标记的RNA进行部分消化
      • 2.聚丙烯酰胺凝胶电泳
    • 质谱法