PCR技术的原理及应用

分子生物学、人卫九版，PCR(聚合酶链反应):是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术，它可看作生物体外的特殊DNA 复制。

PCR 技术的原理与应用

• 概念
  • PCR（聚合酶链反应）：是一种用于放大扩增特定的DNA 片段的分子生物学技术，它可看作生物体外的特殊DNA 复制。
• 特点
  • 高敏感
  • 高特异
  • 高产率
  • 可重复
  • 快速简便
  • 对样品要求低
• 工作原理
  • PCR体系
    • 模板DNA
    • 特异引物（上、下游引物）
    • dNTP
    • 耐热性DNA聚合酶（如taq DNA酶）
    • 含有mg²+缓冲液
    • 蒸馏水
  • PCR的基本反应步骤
    • ①变性
      • 将反应体系加热至95℃，使模板DNA完全变性成为单链，同时引物自身以及引物之间存在的局部双链也得以消除。
    • ②退火
      • 将温度下降到适宜温度（一般较Tm低5℃），使引物与模板DNA结合。
    • ③延伸
      • 将温度升至72℃，DNA聚合酶以dNTP为底物催化DNA的合成反应。
• PCR产物分析方法
  • ①电泳分析
  • ②酶切分析
  • ③杂交分析
  • ④序列分析
  • ⑤高效液相色谱分析
• PCR技术的主要用途
  • ①获得目的基因片段
  • ②DNA和RNA的微量分析
  • ③DNA序列分析
  • ④基因突变分析
  • ⑤基因的体外突变
• 常用的PCR技术
  • ①逆转录PCR技术
  • ②原位PCR技术
  • ③定量PCR（实时PCR技术）