酶的提取与分离纯化

这是一个关于酶的提取与分离纯化思维导图，包含沉淀分离、 离心分离、细胞破碎、 提取等。

酶的提取与分离纯化

• 沉淀分离
  • 概念
  • 方法及原理
• 离心分离
  • 概念
  • 离心机
    • 常速离心机
      • 又称低速离心机，8000r/min，相对离心力1x10⁴g
    • 高速离心机
      • （1～2.5）x10⁴r/min， 1x1⁴～1x10⁵g； 防止温度升高导致酶失活，设有冷冻装置
    • 超速离心机
      • （2.5～12）x10⁴r/min 5x10⁵g； 离心管帽（防止样品液溅出） 冷冻系统（防止温度升高、温度控制系统） 真空系统（减少空气阻力、摩擦） 一系列安全保护系统、制动系统，各种指示仪表
  • 离心方法
    • 差速离心
      • 操作简单、方便； 分离效果较差，分离的沉淀物含有较多杂质。
    • 密度梯度离心
      • 分离效果好，可一次获得较纯颗粒； 适用范围光，既能分离沉淀系数差的颗粒， 又能分离有一定浮力密度的颗粒； 颗粒不会挤压变形，能保持颗粒适性，防止 形成的曲带由于对流而引起混合
      • 凸形梯度贮液室截面积大 凹型梯度混合室截面积大
    • 等密度离心
  • 离心条件的确定
    • 离心力
      • 离心力作用下，不同浮力密度的颗粒 向下沉降或向上漂浮
    • 离心时间
    • 温度
      • 一般在4℃；某些耐热性较好的酶在室温下离心分离 超速和高速离心时，必须采用冷冻系统
    • PH
      • 在酶稳定的PH范围内
• 提取
  • 概念
  • 方法
    • 盐溶液提取
    • 酸溶液提取
    • 有机溶剂提取
  • 影响因素
    • 温度
    • PH
    • 提取液的体积
• 细胞破碎
  • 概念
  • 方法
    • 机械破碎法
      • 捣碎法
      • 研磨法
      • 匀浆法
    • 物理破碎法
      • 温度差破碎法
      • 压力差破碎法
      • 超声波破碎法
    • 化学破碎法
      • 添加有机溶剂
      • 添加表面活性剂
    • 酶促破碎法
      • 自溶法
      • 外加酶制剂法