蛋白质分离与鉴定

414考研，生化第三章，蛋白质分离与鉴定，本考研狗自己做的思维导图，巨细无比绝不敷衍。还在为一整本课本根本不知道怎么背所困恼吗？拥有这张思维导图，你再背书就如图庖丁解牛，条条是理！

蛋白质分离与鉴定

• 蛋白质性质
  • 酸碱性质
    • 两性电解质
    • 溶液pH与pI
  • 溶解度
    • 清、球、谷、醇溶谷、组、鱼精、硬
  • 大小和形状
    • 相对分子质量：10^3
  • 胶体性质
    • 胶体溶液，不易聚沉
      • 水化层
        • 破坏
      • 双电层
        • 破坏：PH处于等电点
  • 免疫化学性质
    • 抗原
      • 抗原决定簇
      • 半抗原
    • 抗体（免疫球蛋白）Ig
      • 特异性
      • 多样性
      • 不均一性
      • 双重性
        • +二抗
• 分离纯化（沉淀）
  • 根据 溶解度
    • 等电沉淀
      • 破双电层
        • 粗分离
    • 盐溶！与盐析！
      • 硫酸铵
        • 保持活性
          • 初级分离
            • 盐溶
              • 低浓度中性盐
                • ↑溶解度
            • 盐析
              • 初级分离
                • 高浓度中性盐
              • 浓缩
    • 有机溶剂沉淀
      • 破水化层
        • 高浓度有机溶剂→沉淀
          • 甲醇、乙醇、丙酮
        • 结构稳定的蛋白+低温试剂
    • 变性沉淀
      • 加热
      • 有机酸（高浓度三氯乙酸）
  • 根据 分子大小
    • 透析！、超滤
      • 半透膜
        • 透析
          • 除去小分子盐组分
        • 超滤
          • 浓缩
      • 透析袋
        • 浓缩
          • 蔗糖
          • 聚乙二醇
    • 密度梯度离心
      • 沉降速度法
        • 蔗糖密度梯度
        • 重的沉降快
    • 凝胶过滤！层析
      • 分离纯化
        • 交联葡萄糖（珠状）
        • 大的先下，小的后下
      • 除去蛋白质中小分子物如无机盐
      • 分子筛效应
  • 根据 电荷不同
    • 电泳！
      • 聚丙烯酰胺凝胶电泳
      • 等电聚焦电泳
      • 双向电泳
      • 概要
        • 电荷效应
        • 分子筛效应
        • 不连续电泳:+浓缩效应
    • 离子交换层析
      • 阳离子交换剂
        • 羧-纤
        • 羧-琼
      • 阴离子交换剂
        • 二-纤
  • 根据 蛋白质吸附特性
    • 羟基磷灰石层析
    • 疏水作用层析
  • 根据 生物分子特异亲和力
• 鉴定
  • 相对分子质量 鉴定
    • 质谱法
      • 灵敏度+准确度很高
    • SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳
      • 微量样品即可
      • 分子量↓，迁移v↑
      • 变性剂
        • 亚基
      • 阴离子
    • 凝胶过滤法
      • 球状蛋白质
      • 天然蛋白质
    • 沉降速度法
      • 定量
        • 沉降系数S↑，分子量↑
      • 分离
  • 免疫印迹 分析！
    • 定性分析
      • 凝胶电泳分离
      • 抗原抗体特异结合
    • 表达分析
      • 皮克级
    • 酶联免疫吸附法 ELISA
      • 蛋白质的吸附能力酶
      • 抗原抗体特异结合
      • 酶标二抗（高效性）→微弱抗原信号√
  • 定量分析（含量测定）
    • 双缩脲反应
      • 灵敏度低
        • 浓度高的
    • Folin-酚反应
      • 较高
        • 可溶性高的
    • 考马斯亮蓝结合反应
      • 微克级
        • G-250（Bradfold)
        • R-250（用于电泳凝胶的蛋白质条带染色）
    • 凯氏定氮法
      • 有机氮→比实际含量高
        • 成分复杂+不溶性
          • 种子+牛奶
    • 紫外吸收法
      • 280nm
        • 浓度↑，光吸收值↑
      • 不易损失
        • 纯化中洗脱峰检测
  • 纯度测定
    • SDS-PAGE等