医学细胞生物学（第6版）第三章第二节 细胞的分离和培养

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细胞的分离和培养

• 分离方法
  • 酶解方法
    • 用酶消除细胞间的连接和细胞外机制
    • 基本原则
      • 所用溶液等渗＋具有缓冲性离子强度
      • 分离体系保持低温
      • 无菌操作
      • 所用的试剂、器皿需要高压灭菌或过滤除菌
  • 物理和生物学特性
    • 可简单有效地分离和筛选细胞
    • 类型
      • 贴壁生长与悬浮生长
        • 贴壁生长
          • 上皮 内皮 成纤维 骨骼肌 血液细胞 死细胞
        • 悬浮生长
          • 分离生长于血液、腹水或胸水等 悬液组织中的细胞
    • 密度
      • 血浆
        • 白细胞分离
          • 血浆层（上层）、红细胞层（下层）、白细胞层（中层）
      • 在离心力作用下，细胞可沉降于与自身密度相同的密度平衡点
  • 流式细胞术
    • 精确分选荧光标记的细胞
    • 别称
      • 荧光激活细胞分选仪
    • 组成
      • 液流系统、激光发器件、信号检测系统、控制系统
    • 特点
      • 用带有荧光的的特异抗体标记待分离的细胞，然后在流式细胞仪中从未标记的细胞中分选出标记细胞
  • 免疫磁珠法
    • 获得高纯度细胞
    • 优势
      • 操作简便
      • 特异性强
      • 具有良好的细胞回收率
      • 磁珠颗粒对细胞无影响
  • 激光捕获显微切割技术
    • 从组织切片中精确分离单一细胞
    • 不能用于分离活细胞
    • 过程
      • 制备组织切片
      • 覆以透明薄膜
      • 激光束切割所需区域
        • 覆膜溶化
      • 激光束将其弹到细胞收集管
    • 适用于
      • 待分离细胞在组织（切片）中数量较少或呈散在分布的情况
• 细胞培养
  • 概念
    • 无菌条件下，从机体中取出组织或细胞，模拟机体内正常生理状态下生存的基本条件， 让它在培养皿中继续生存、生长和繁殖的方法
  • 全过程在无菌环境
    • 无菌室
      • 组成
        • 操作间
          • 超净工作台、倒置显微镜等
        • 缓冲间
  • 培养箱
    • 填充二氧化碳
      • 缓冲和维持细胞培养基的pH
      • 提供适宜细胞生长的酸碱度
    • 培养基含有营养物质
      • 氨基酸、维生素、微量元素等
    • 细胞实际培养时，还需添加一些天然生物成分
      • 血清
  • 主要方式
    • 原代培养
      • 直接从体内获取的组织或细胞进行首次培养
    • 传代培养
      • 当原代细胞经增值到一定密度后，将细胞分散从一个培养器以一定比例移到另一个或几个容器中的扩大培养
      • 体外传代培养一半不超过50次
  • 来源于细胞体内的细胞可以在体外建系
    • 细胞系
      • 来源于恶性肿瘤组织的细胞能够在体外无限繁殖、传代
        • Hela细胞
    • 细胞株
      • 分离出单个细胞使之增殖成细胞群
        • 方法：细胞克隆化
          • 改善了细胞的均一性
  • 培养中的细胞 是细胞行为研究的主要模型