导图社区 紫外–可见分光光度法
紫外-可见分光光度法是在190~800nm波长范围内测定物质的吸光度,用于鉴别、杂质检查和定量测定的方法。
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第14章DNA的生物合成读书笔记
第十一章 紫外–可见分光光度法
紫外–可见分光光度法的基本原理和概念P154
电子跃迁类型
σ→σ*跃迁
π→π*跃迁
n→π*跃迁
n→σ*跃迁
电荷迁移跃
配位场跃迁
紫外–可见吸收光谱的有关概念
吸收光谱
吸收峰
谷
肩峰
末端吸收
助色团
红移
蓝(紫)移
增色效应和减色效应
强带和弱带
吸收带及其分子结构的关系
R带
K带
B带
E带
电荷转移吸收带
配位体场吸收带
影响吸收带的因素
位阻效应
跨环效应
溶剂效应
体系pH影响
朗伯–比尔定律
数学表达式
吸光系数表达方式
摩尔吸光系数
在一定波长时,溶液浓度为1mol/L、厚度为1cm的吸光度,用ε或EM标记
百分吸光系数或称比吸光系数
在一定波长时,100ml溶液中含被测物质1g、厚度为1cm的吸光度
偏离比尔定律的因素
化学因素
光学因素
非单色光
杂散光
散射光和反射光
非平行光
透光率测量误差
暗噪声
讯号噪声
紫外–可见分光光度计P164
主要部件
光源
钨灯和卤钨灯
通常取波长大于350nm的光为可见光区
氢灯或氘灯
150nm~约400nm
单色器
洗收池
检测器
光电池
光电管
光电倍增管(PMT)
光二极管阵列检测器
讯号处理与显示器
分光光度计的类型和光学性能
几种光路类型
单光束分光光度计
双光束分光光度计
双波长分光光度计
二极管阵列检测分光光度计
光纤探头式分光光度计
光学性能
波长范围
能测量190~1100nm的波长
光谱带宽
2nm
波长准确度
误差为±0.3nm
波长的重现性
重复使用同一波长,单色光实际波长的变动≤0.2nm
透光率测量范围
0~200%(T)
吸光度测量范围
-0.3~3.00(A)
光度准确度
以透光率测量值的误差表示。误差为±0.3%
光度重复性
同样情况下重复测量透光率的变动性±0.3%
分辨率
单色器分辨两条靠近的谱线的能力
260nm处为Δλ=0.3nm
仪器的校正
波长的校正
稀土玻璃
苯蒸气
吸收度的校正
最普遍用铬酸钾溶液
吸收池的校正(配对)
参比溶液
紫外–可见分光光度分析方法P168
定性分析
对比吸收光谱特征数据
对比吸光度(或吸光系数)的比值
对比吸收光谱的一致性
纯度检查
杂质检查
杂质的限量检测
单组份的定量方法
吸光系数法
根据比尔(Beer)定律
工作曲线法
对照法
同时测定多组分的定量方法——计算分光光度法
选择波长的原则
干扰组分b在这两个波长应具有相同的吸光度
被测组分在这两个波长处的吸光度差值ΔAᵃ应足够大
紫外吸收光谱用于有机化合物分子结构研究
有机化合物的紫外线吸收光谱
饱和碳氢化合物
在200~400nm的波长上,没有吸收
含孤立助色团和生色团的饱和有机化合物
吸收峰的波长较长
有n→σ*跃迁
共轭烯烃
有π→π*跃迁
随着共轭体系的增加,吸收峰长移增加
α,β不饱和酮、醛、醛和酯
羧酸和酯的π→π*跃迁吸收峰比相应的酮、醛吸收峰波长较长,而n→π*跃迁吸收峰比相应的酮、醛的吸收峰较短
溶剂极性增加
π→π*跃迁红移
n→π*跃迁蓝移
芳香族化合物
苯和取代苯
供电子取代基
–CH₃ < –Cl < –Br < –OH < –OCH₃ < –NH₂ < –O < –NHCOCH₃ < –NCH₃
吸电子取代基
–NH₃⁺ < –SO₂NH₂ < –COO⁻ ≤ CN⁻ < –COOH < –CHO < –NO₂
助色团取代
生色团取代
芳杂环化合物
有机化合物结构的研究
从吸收光谱中初步推断基团
异构体的确定
结构异构体
顺反异构体
化合物骨架的推定
比色法
显色反应及其条件
显色反应的要求
反应的条件
显色试剂与溶剂
选用显色试剂不但应依据显色反应的灵敏度、显色的稳定性和反应的选择性,同时还应考虑试剂的用量
酸碱度
时间
温度及其他
反应条件的控制
测定方法