细胞衰老的诱导及β-半乳糖苷酶的检测

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细胞衰老的诱导及β-半乳糖苷酶的检测

• 细胞培养
  • 在35mm细胞培养皿(皿中放入盖玻片)中培养的细胞密度达60-70%。
• 诱导衰老
  • 实验组：加含10μM ETO(依托泊苷) ，于37 ℃孵育24小时。
  • 对照组：不经ETO处理。
• 固定
  • 吸取细胞培养液，用PBS洗涤一次，加入0.5mlβ-半乳糖苷酶染色固定液，室温固定15min。
• 洗涤
  • 吸除细胞固定液，用PBS洗涤细胞3次，每次3min。
• 显色
  • 吸除PBS，每孔加入0.5ml染色工作液，37 ℃孵育过夜，可以用parafilm或保鲜膜封住12孔板防止蒸发。
• 观察
  • 普通光学显微镜下观察，统计衰老细胞率（=蓝染细胞数/总计细胞数×100%）
• 保存
  • 如不能及时观察计数，可以去除染色工作液，加入2ml PBS，4℃可保存数天，或加上封片液封片后，4℃可保存较长时间。