细菌生化鉴定技术

微生物检验之细菌生化鉴定技术知识总结，包括碳水化合物的代谢试验、蛋白质和氨基酸的代谢试验、碳源利用试验、酶类试验等内容。

细菌生化鉴定技术

• 碳水化合物的代谢试验
  • 糖(醇、苷）类发酵试验
    • 分解糖类产酸，酸性（淡黄色)
    • 产气，出现气泡
    • 不分解糖类，无变化
    • 鉴定细菌最基本的试验
  • 葡萄糖氧化/发酵试验（O/F试验）
    • 氧化型细菌
      • 仅在有氧环境中分解葡萄糖
        • 加液化石蜡管不产酸（不变色），不加产酸变黄
    • 发酵型细菌
      • 有氧无氧环境中都能分解葡萄糖
        • 都变黄（产酸）
    • 产碱型细菌
      • 有氧无氧都不分解葡萄糖
        • 均不变色
    • 肠杆菌（发酵型）和非发酵型菌的鉴别，葡萄球菌与微球菌的鉴别
  • 甲基红试验（MR试验)
    • 红色——阳性，PH4.4以下
    • 黄色——阴性，PH5.4以上
    • 肠杆菌科细菌的鉴别
  • VP试验
    • 红色——阳性
    • 肠杆菌科细菌的鉴别
    • 甲基红试验阳性的细菌，一般VP试验为阴性
  • β-半乳糖苷酶试验（ONPG试验）
    • 菌悬液，黄色——阳性
    • 迟缓发酵乳糖的细菌的快速鉴定
  • 七叶苷水解试验
    • 黑色——阳性
    • 不变色——阴性
    • D群链球菌（阳性）与其他链球菌（阴性）的鉴别
    • 肠杆菌科细菌、其他革兰氏阴性菌及厌氧菌的鉴别
• 蛋白质和氨基酸的代谢试验
  • 靛基质试验（吲哚试验）
    • 红色——阴性
    • 无色——阴性
    • 肠杆菌科细菌的鉴定，大肠埃希菌多为阳性，沙门氏菌则为阴性
  • 硫化氢试验
    • 黑色沉淀——阳性
    • 无变化——阴性
    • 肠杆菌科属间的鉴定，沙门氏菌属、枸橼酸杆菌属、变形杆菌属的细菌大多为阳性
  • 脲酶试验
    • 红色——阳性
    • 不变色——阴性
    • 肠杆菌科中变形杆菌属的鉴定，也可用于幽门螺旋杆菌等的鉴定
  • 苯丙氨酸脱氨酶试验
    • 绿色——阳性
    • 无色——阴性
    • 肠杆菌科细菌鉴定。变形杆菌属、摩根菌属及普罗菲登斯菌属均为阳性，肠杆菌科的其他细菌都为阴性
  • 氨基酸脱羧酶试验
    • 紫色——阳性
    • 黄色——阴性
    • 赖氨酸、鸟氨酸、精氨酸脱羧酶试验主要用于肠杆菌科细菌的鉴定
      • 沙门氏菌属中，除伤寒沙门氏菌和鸡沙门氏菌外，其他都为阳性
      • 志贺氏菌属中，宋内志贺氏菌、痢疾志贺氏菌1型、鲍氏志贺氏菌13型均为阳性，其他均为阴性
• 碳源利用试验
  • 枸橼酸盐利用试验
    • 深蓝色——阳性
    • 绿色——阴性
    • 肠杆菌科细菌属间的鉴别
      • 沙门氏菌属、克雷伯菌属、枸橼酸杆菌属等——阳性
      • 埃希氏菌、志贺氏菌属——阴性
  • 丙二酸盐利用试验
    • 深蓝色——阳性
    • 绿色——阴性
    • 肠杆菌科细菌属间的鉴别
      • 克雷伯菌属——阳性，枸橼酸杆菌属、哈夫尼亚菌属及肠杆菌属中有的也呈——阳性
• 酶类试验
  • 触酶（过氧化氢酶）试验
    • 产生大量气泡——阳性
    • 不产生大量气泡——阴性
    • 革兰氏阳性球菌的初步分类
      • 葡萄球菌、微球菌——阳性
      • 链球菌——阴性
  • 氧化酶（细胞色素氧化酶）试验
    • 立即出现红色，继而变为深红色至深紫色——阳性
    • 肠杆菌科细菌与假单胞细菌（非发酵菌）的鉴别
      • 肠杆菌科细菌——阴性
      • 假单胞菌、奈瑟菌属、莫拉菌属细菌——阳性
  • 凝固酶试验
    • 玻片法
      • 无自凝，菌液呈均匀混浊——阴性
      • 菌液聚集成团快或颗粒状——阳性
    • 试管法
      • 血浆凝固成胶冻状——阳性
      • 血浆能流动不凝固——阴性
    • 葡萄球菌的鉴定
  • DNA酶试验
    • 出现透明环——阳性
    • 无透明环——阴性
    • 葡萄球菌、沙雷菌、变形杆菌——阳性
  • 硝酸盐还原试验
    • 肠杆菌科细菌、假单胞菌、厌氧菌的鉴别
    • 肠杆菌科细菌、铜绿假假单胞菌、嗜麦芽窄食单胞菌、伟荣球菌——阳性
  • 卵磷脂酶试验
    • 菌落周围形成乳白色混浊环——阳性
    • 厌氧菌的鉴定
      • 产气荚膜梭菌、诺维梭菌——阳性
  • 胆汁溶菌试验
    • 平板法
      • 菌落消失——阳性
    • 试管法
      • 加胆盐的菌液变透明，对照管仍混浊——阳性
    • 肺炎链球菌——阳性，甲型链球菌——阴性
  • CAMP试验
    • B群链球菌和金黄色葡萄球菌交界处出现箭头状溶血区——阳性
    • 无箭头状透明溶血区——阴性
    • 链球菌属的鉴定
• 其他生化试验
  • 克氏双糖铁（KIA）试验
    • 接种针从深层向上提起，在斜面上由下至上划线
    • 分解乳糖产酸——整个培养基呈黄色
    • 斜面碱性/深层酸性——只分解葡萄糖而不分解乳糖
      • 志贺氏菌
    • 斜面碱性/底层碱性——不发酵糖类
      • 粪产碱杆菌
    • 斜面碱性/底层酸性（黑色）——葡萄糖发酵，乳糖不发酵，产生硫化氢
      • 沙门氏菌，普通变形杆菌
    • 肠杆菌科细菌的鉴定和鉴别
  • 动力-靛基质-脲酶（MIU）试验
    • 接种线变宽、变模糊，培养基变混浊——动力试验阳性
    • 玫瑰红色——靛基质试验阳性
    • 桃红色——脲酶试验阳性
    • 与KIA试验共同用于肠杆菌科细菌的鉴定