微生物

本导图梳理了微生物的相关内容，包含涂片、革兰氏染色原理、革兰氏染色方法、细菌培养揭样类型、真菌培养、接样流程等。

微生物

• 涂片
  • 1.滴加一滴生理盐水于干净载玻片中
  • 2.用干净接种环从有菌落的培养基中挑取适量菌落均匀涂布于盐水中。
  • 3.自然晾干后，在火焰上迅速通过三次，加热固定。
• 革兰氏染色原理
  • 革兰氏阳性菌：细胞壁成分：肽聚糖形成的网状结构组成，在染色过程中，当用乙醇处理时，由于脱色而引起网状结构中的孔径变小，通透性降低，使结晶紫-碘复合物被保留在细胞内而不易脱色，因此呈蓝紫色。
  • 革兰氏阴性菌：细胞壁成分：主要是脂多糖，脂类物质含量高，用乙醇脱色时，脂类物质被溶解，细胞壁的通透性增加，使结晶紫-碘复合物易被乙醇抽出而脱色，然而又被染上复染液的颜色，因此呈现红色。
• 革兰氏染色方法
  • 初染：成分：龙胆紫/结晶紫，染色10s后，水洗。
  • 媒染：成分：碘液，染色10s后，水洗。
  • 脱色：成分：95%乙醇，染色10-20s，但应该将染剂脱落到无色为止后，水洗
  • 复染：沙黄，染色10s后，水洗，自然晾干。
  • 镜检
    • 革兰氏阳性菌：呈蓝紫色（龙胆紫的颜色）
    • 革兰氏阴性菌：呈红色（复染液的颜色）
• 细菌培养接样类型
  • 需氧（细菌培养）
    • 拭子
      • 鼻腔分泌物
      • 皮肤
      • 耳道
      • 窦道
      • 肿物
    • 鼻腔灌洗液
    • 胆汁
    • 尿液（需要菌落计数）
  • 厌氧培养
    • 体腔积液
    • 肿物
  • 骨头（带固定板，或钉子）
    • 将固定板或钉子放入生理盐水中进行涮洗。
  • 活检
    • 胆囊
    • 内脏。。。
  • 培养基
    • 血琼脂培养基
    • 麦康凯培养基
• 真菌培养
  • 耳道分泌物
  • 皮肤，皮屑
  • 毛发
  • 肿物
  • 培养基
    • DTM（葡萄糖胰蛋白胨琼脂）：鉴别芽孢杆菌
    • SDA ，沙氏琼脂（含氯霉素）：用于鉴别皮肤真菌，
    • PDA(马铃薯葡萄糖培养基）：酵母菌，霉菌，大分生孢子
    • 鉴别：酵母菌，霉菌
• 接样流程
  • 尿液
    • 1.镜检看菌，（未见/偶见/少量/+/++/+++）
    • 2.尿液稀释
      • 未见/偶见：200μm
      • 少量：10μm
      • +:100倍,10-2（990μm生理盐水，10μm尿液稀释后，充分混匀，取10μm已稀释后的尿液均 匀涂布于血琼脂培养基与麦康凯琼脂培养基）
      • ++：10000倍，10-4（990μm生理盐水，10μm尿液稀释后充分混匀，取10μm放入另一个990μm生理盐水中，进行10000倍稀释后充分混匀后，取10μm稀释后的尿液进行均匀涂布于血琼脂培养基和麦康凯琼脂培养基）
      • +++:10-6,不建议去稀释，一般为了保底可以长出菌落，稀释到10-4即可。
    • 3.均匀涂布
      • 血琼脂培养基
      • 麦康凯琼脂培养基
      • 1.在平板侧面标注：动物主人名字/样品/稀释度/时间2.用接种环，多次角度进行均匀涂布。
    • 4.菌落计数
    • 均匀涂布适用于菌落计数
  • 真菌：毛发和皮屑
    • 将培养基刀割四方，将毛发插在琼脂缝中，若是牙刷刷取皮屑，将牙刷上的皮屑均匀按压在平板上。
  • 其他接样
    • 四分区划线：适用于纯化，得到单个菌落
• 例如：拭子，滴加生理盐水湿润棉头，四分区划线，其他样品方法相同。