亚细胞定位

本图带你学习转录因子中亚细胞定位的知识点，包含亚细胞定位的概念、生物信息学预测法、免疫荧光法、GFP融合蛋白表达法。

亚细胞定位

• 概念：亚细胞定位是查找生物大分子在细胞内的具体存在的位置，如在核内、胞质内或者细胞膜上存在。
• 方法
  • 生物信息学预测法
    • 氨基酸组成进行亚细胞定位的生物信息学预测 （硕士论文中曾用该方法对克隆基因进行预测）
  • 免疫荧光法
  • GFP融合蛋白表达法
    • 构建融合蛋白载体，并在转染之后有效表达 （构建质粒-农杆菌转化等）
    • GFP是绿色荧光蛋白，在扫描共聚焦显微镜的激光照射下会发出绿色荧光
    • 载体应该是GFP荧光表达载体
• 小知识
  • 载体根据功能分为克隆载体和表达载体
    • 克隆载体：只是把你要的基因片段拿到就可以了，不管读码框什么的。 （例如用在基因克隆等）
    • 表达载体是不但要你的目的基因连在上面，而且要表达蛋白。 （例如瞬时转化用到的载体
• 由定位载体这个问题，发现其属于亚细胞定位