导图社区 血液检验
临床检验学的第一章和第二章的总结概括,主要内容有红细胞检验、白细胞检验、血小板检验。
编辑于2022-05-07 07:54:21血液一般检验
红细胞检验
红细胞(RBC)使血液中数量最多的有形成分,主要功能携氧,作为二氧化碳的呼吸载体和维持酸碱平衡。
红细胞计数
红细胞计数是检测单位容积中红细胞的数量
检测原理:采用等渗稀释液将血液稀释一定倍数(200),充入改良牛鲍血细胞计数板中,在显微镜下数一定区域内的红细胞。
步骤:准备稀释液,采血和加血,充池,计数(计数中央大方格内四角和正中5个中方格内的红细胞),计算
试剂:Hayem稀释液
氯化钠--调节渗透浓度
硫酸钠--防止红细胞聚集
氯化汞--防腐剂,有毒
计数:数上不数下,数左不数右
红细胞数/L=N/100×10*12(N为五个中方格内红细胞数字)
参考区间:男性(4.0-5.5)×10*12/L,女性(3.5-5.0)×10*12/L
低于3.5×10*12/L可诊断贫血,低于1.5×10*12/L应考虑输血
红细胞生理性变化和临川意义
生理性变化
增多
缺氧,新生儿,高山居民,登山运动员,剧烈运动和体力劳动
雄激素增高,成年男性高于女性
肾上腺皮质激素增多,情绪波动
长期吸烟,静脉压破,日内差异(上午7时间=最高),药物影响
减少 主要见于生理性贫血
生长发育过快,如新生儿
造血功能减退老人
血容量增加,妊娠中期
长期饮酒
病理性变化
相对性增多 血容量减少 呕吐,发热,腹泻
绝对性增多
继发性增多
组织缺氧,EPO代偿性增高,慢性心肺疾病,发绀型先天性心脏病
EPO非代偿性增高,继发性红细胞增多,多种癌症
原发性增多 真性红细胞增多症
病理性增多
病理性减少
红细胞生成减少
骨髓功能衰竭的再生障碍性贫血
造血物质缺乏利用障碍,缺铁性贫血,巨幼红细胞贫血
红细胞破坏过多
红细胞丢失,急性慢性失血性贫血
血红蛋白测定
血红蛋白是人体有核红细胞及网织红细胞内合成的一种含有色素辅基的结合蛋白质,是红细胞内的运输蛋白。每个Hb分子含有4条珠蛋白肽链,每条肽链结合1个亚铁血红素,形成具有四级空间结构的四聚体,以利于结合氧气和二氧化碳
Hb=珠蛋白(α1α2β1β2)+血红素
检测原理:HiCN法,血红蛋白(SHb除外)中亚铁离子被高铁氰化钾氧化为高铁离子,血红蛋白转化为高铁血红蛋白(Hi),Hi与氰化钾(KCN)中的氰离子反应生成HiCN.HiCN最大吸收波峰为540.在特定条件下, HiCN 毫摩尔消光系数为44L/( mmolcm )。 HiCN 在540nm处的吸光度与浓度成正比,根据测得吸光度可求得血红蛋白浓度。
血红蛋白测定
方法学评价
参考区间
成年:男性120~160 g / L ,女性110~150g/ L 。
新生儿170~200 g / L 。
临床意义
Hb 的临床意义与红细胞计数相似,但判断贫血程度优于红细胞计数。根据 Hb 浓度可将贫血分为4度。
轻度贫血: Hb <120g/ L (女性 Hb <110g/ L );
中度贫血: Hb <90g/ L ;
重度贫血: Hb <60g/ L ;
极重度贫血: Hb <30g/ L
红细胞比容测定
血细胞比容(Hct,HCT,PCV)是指一定体积的全血中红细胞所占体积的相对比例
检测原理
离心法,常用微量法和温氏法,其检测原理基本相同。自上而下分为血浆层,血小板层,白细胞和有核红细胞层,还原红细胞层和氧合红细胞层
血液分析仪,HCT=红细胞计数×红细胞你平均体积
操作步骤
微量法/吸血,封口,离心,读数
温氏法/加标本,离心,读数
方法学评价
质量控制
参考区间
成人:男性:0.4-0.5;女性:0.37-0.48
新生儿0.47-0.67
儿童0.33-0.42
临床意义
HCT的临床意义与红细胞计数相似.HCT减低是诊断贫血的指标,若红细胞数量正常,血浆量增加,为假性贫血;HCT增加可因红细胞数量绝对增加或血浆量减少所致
HCT的主要应用价值为
临床补液量的参考:脱水
真性红细胞增多症诊断指标:HCT>0.7
计算红细胞平均指数的基础:MCV,MCHC
红细胞平均指数
红细胞平均指数包括红细胞平均体积(MCV)红细胞平均血红蛋白量(MCH)和红细胞平均血红蛋白浓度(MCHC)
检测原理
参考区间
临床意义:红细胞平均指数可用于贫血形态学分类 及提示贫血的可能原因。但红细胞平均指数仅反映了红细胞群体平均情况,无法阐明红细胞彼此之间的差异
网织红细胞检测的目的
网织红细胞(RET)是介于晚幼红细胞和成熟红细胞之间的过渡细胞,略大于成熟红细胞,胞质中残留嗜碱性物质RNA经碱性染料活体染色后形成蓝色火或紫色的点粒状或丝网状沉淀物
网织红细胞分型及特征
检测目的
鉴别贫血的类型(增生性,非增生性,增生增高性)
检测骨髓的功能
检测贫血的治疗结果
评估骨髓移植后,再生障碍性贫血细胞毒药物诱导治疗后或EPO治疗后的红细胞造血情况
检测原理
普通显微镜法:活体染料的碱性着色(煌焦油蓝,新亚甲蓝)基因可与网织红细胞RNA的磷酸基结合,使RNA胶体间的负电荷减少而发生凝缩,形成蓝色的点状,现状或网状结构
操作步骤:1.试管法/加染液,加血染色,制备涂片,观察(Miller窥盘计数法)
计算:网织红细胞百分数=大方格B内的网织红细胞数/小方格A内的红细胞数×9
玻片法:加染液,加血液,制备涂片,观察技术和计算
网织红细胞计数染色原理:网织红细胞内RNA的磷酸基(带负电荷)能与煌焦油蓝,新亚甲蓝等碱性染料的有色反应基(带正电荷)结合,形成核酸与碱性染料复合物的多聚体,凝成颗粒,连缀成线,构成浅蓝或深蓝的网织状结构,凡含有两个以上深染颗粒的无核红细胞
质量控制
选择合适的染料:煌焦油蓝,新亚甲蓝(WHP推荐使用,对RNA着色强,试剂稳定,Hb几乎不着色,便于识别),中性红,亚甲蓝
正确辨认网织红细胞:外周将血液网织红细胞主要为Ⅳ型,凡含有2个或2个以上颗粒,且颗粒必须远离细胞边缘的红细胞均为网织红细胞
参考区间:成人儿童:0.5%-1.5%,新生儿:2.0%-6.0%,成人绝对值(24-84)×10*9/L
临床意义:网织红细胞计数反映骨髓造血功能重要指标
评价骨髓增生能力,判断贫血类型
评价疗效
放疗和化疗的监测
红细胞沉降率
红细胞沉降率(ESR)简称血沉,是指在规定条件下,离体抗凝全血中的红细胞自然下沉的速率
检测原理
魏氏法:将枸橼酸钠抗凝血于血沉管中垂直1h,血沉测定实际上是测量单位时间内红细胞下沉后血浆段的高度,而并非真正红细胞沉降的速度。
方法评价
优点:国内的规范方法,对操作器材,条件和方法有严格规定,一次性血沉管使用方便,卫生安全
一次性血沉管成本较高,质量难以保证
质量控制
物理条件的要求
抗凝剂与血液比1:4
测定环境,应在室温下(18-25)下进行测定,随温度升高,血沉会加快
检测时间,采血后4h内完成检测,枸橼酸钠抗凝血4℃保存可延迟到6h
质控方法,EDTA抗凝,HCT为0.35左右,ESR在15-105mm/h范围,检测前将标本颠倒混匀16次。
血沉测定影响因素-血浆因素
增加:纤维蛋白原,球蛋白和异常克隆性免疫球蛋白,α,β球蛋白,胆固醇和三酰甘油
减少:清蛋白,糖蛋白及磷脂酰胆碱等增高,抑制红细胞缗钱状形成
口诀:一个美丽的小姑娘在荡秋千越荡越高,下来走在洁白的鹅暖石上。解释使血沉加速的因素是:胆固醇,球蛋白和纤维蛋白增加;减少是白蛋白和卵磷脂
参考区间:男性0-15mm/h,女性0-20mm/h
临床意义
血沉主要用于观察病情的动态变化,区别功能性与器质性病变,鉴别良性与恶性肿瘤
生理性血沉加快
临床意义
血沉减慢:见于真性红细胞增多症 ,低纤维蛋白原血症,充血性心力衰竭,红细胞形态异常
红细胞形态检查
检测原理:显微镜检查法,用于红细胞形态的识别,特别是异常形态的鉴别
操作步骤:制备良好的染色血涂片,低倍镜观察,油镜观察
人为原因造成的红细胞形态异常
人为原因 红细胞形态异常
制备血涂片不当 棘形红细胞,皱缩红细胞,红细胞缗钱状
使用非疏水性载玻片 口形红细胞
染色不当 嗜多色红细胞
抗凝剂浓度过高,血液标本久置 锯齿状红细胞
血涂片干燥过度,固定液中混有水分 面包圈形红细胞
血涂片末端附近 长轴方向一致的假性椭圆形红细胞
临床意义
正常形态红细胞
正常红细胞呈双凹圆盘状,大小相对均已,平均直径7.2um
Wrihgt染色后为粉红色或琥珀色,血红蛋白充盈良好,呈正色素性,向心性淡染
中央部位为生理性淡染区,大小约为细胞直径1/3,胞质内无异常结构
红细胞异常形态
大小异常
形状异常
血红蛋白异常
红细胞结构异常及排列异常
白细胞检验
白细胞计数
白细胞计数(WBC)结果仅反映了循环池的粒细胞数量变化
操作步骤:准备,采血,稀释,充池,计数
白细胞/L=4个大方格白细胞N/4×10×20×10*6/L=N/20×10*9
质量控制
采血时间的影响,生理状态影响
技术误差,固有误差
有核红细胞的影响:有核红细胞不能被白细胞稀释液破坏,计数时与白细胞一同被计数而白细胞计数结果偏高
校正公式:校正后白细胞数/L=X×100/(100+y)
参考区间:成人:(3.5-9.5)×10*9/L
白细胞分类计算
外周血中白细胞参考区间
细胞类型 百分数 绝对值(×10*9/L)
中性粒细胞(N) 40-75 1.8-6.3
嗜酸性粒细胞(E) 0.4-8.0 0.02-0.52
嗜碱性粒细胞(B) 0-1 0-0.06
淋巴细胞(L) 20-50 1.1-3.2
单核细胞(M) 3-10 0.1-0.6
检测原理 求得每升血液中各白细胞绝对值=白细胞计数值×该种白细胞分类计数的百分率
操作步骤:
采集血液,制备血涂片你,血涂片染色,显微镜检查,计算,报告
报告:各种白细胞所占比值或百分率
质量控制
抗凝血应充分混匀后再涂片,采集后4小时内涂片
镜检部位体尾交界处
临床意义
白细胞总数与中性粒细胞
生理性增多:下午,运动,情绪激动,严寒暴热,新生儿等,波动再30%无意义
病理性增多:
急性感染(溶血性或肺炎链球菌导致的败血症)
严重的组织损伤及大量血细胞破裂如烧伤
急性大出血
恶性肿瘤
白血病
减少:感染(革兰阴性杆菌)及病毒感染,血液病(再生障碍性贫血),慢性理化损伤,自身免疫性急白,脾功能亢进
嗜酸性粒细胞临意
嗜碱性粒细胞临意
增多:慢性粒细胞白血病,嗜碱性粒细胞白血病,过敏性疾病(溃疡性结肠炎,超敏反应),骨髓纤维化
淋巴细胞临意
生理变化,中性粒细胞与淋巴细胞交叉的点在6-9天,4-5岁
增多,整个婴幼儿期淋巴细胞较高,可达70%
病理性增多:
绝对增多:病毒或细菌所致的传染病如风疹,腮腺炎
相对性增多:再生障碍性贫血,粒细胞缺乏
减少:免疫缺陷病HIV感染,流行性感冒恢复期等
单核细胞临意:病原学增多:某些感染,心内膜炎,黑热病,急性感染的恢复期
白细胞形态检查
外周血正常白细胞形态
细胞 直径 细胞质 形态
中性杆状核粒细胞 10-15 粉红色,颗粒量多细小均匀 圆形
中性分叶核粒细胞 10-15 粉红色,颗粒量多细小均匀 圆形
嗜酸性粒细胞 13-15 橘黄色颗粒,着色不清,整齐排列 圆形
嗜碱性粒细胞 10-12 紫黑色颗粒,着色不清,大小不均 圆形
淋巴细胞 6-15 谈蓝色透明,多无颗粒 圆形或椭圆形
单核细胞 12-20 灰蓝色,灰红色,半透明 圆形或椭圆形不规则
外周血异常白细胞形态
中性粒细胞的核象变化
核左移:外周血中杆状核粒细胞增多并出现晚右粒,中幼粒甚至早幼粒,常见于急性化脓性感染,急性中毒,急性溶血
核右移:外周血中5叶核及5叶核以上的中性粒细胞>3%,伴随白细胞总数减少,属造血功能衰退的表现
中性粒细胞的毒性变化
1. 大小不均:内毒素等因素作用下骨髓内幼稚中性粒细胞发生不规则分裂的结果
2. 中毒颗粒:胞质中出现粗大,大小不等,分布不均的紫黑色核深紫褐色颗粒。特殊颗粒生成受阻或发生颗粒变性所致
3. 空泡:是细胞受损后细胞发生脂肪变性或颗粒缺失的结果
4. 杜勒体:胞质毒性变化而保留的局部嗜碱性区域,圆形,梨形或云雾状,天蓝色或灰蓝色,是胞质局部不成熟的表现
5. 核变性:包括核肿胀,核固缩,核溶解及核碎裂,常伴核膜破裂,核的轮廓不清。常见细胞衰老后,严重感染。
中性粒细胞的其他异常形态
巨多核中性粒细胞:核分叶过多
棒状小体:白细胞胞质中出现的紫红色细杆状物质有助于鉴别急性白血病
淋巴细胞的异常形态
异型淋巴细胞:在病毒,原虫感染或过敏原等因素刺激下,外周淋巴细胞增生并发生形态上的改变。细胞体积增大,嗜碱性增强甚至发生母细胞化
Ⅰ型(空泡型),浆细胞型,含有大小不等的空泡呈泡沫状
Ⅱ型(不规则型),细胞明显增大,外形不规则,胞质有透明感,淡蓝蓝色,可有少许嗜天青颗粒
Ⅲ型(幼稚型),胞体较大,可有1-2个核仁,胞质较少呈深蓝色,偶有小空泡
卫星核淋巴细胞:淋巴细胞主核旁有一个游离的卫星小核。常见于接受较大剂量的电离辐射之后造成的损伤
嗜酸性粒细胞计数
检测原理-显微镜直接计数法
嗜酸性粒细胞稀释液主要成分核作用
保护嗜酸性粒细胞成分(丙酮,乙醇)
促进红细胞核中性粒细胞破坏成分(碳酸钾,草酸铵或低渗)
使嗜酸性粒细胞着色成分(伊红,固绿
操作步骤:准备,采血,稀释,充液,计数(低倍镜下计数2个计数池共计10个大方格的嗜酸性粒细胞)
计数:嗜酸性粒细胞/L=10个大方格的细胞N/20×10*9/L
参考区间:(0.05-0.50)×10*9/L
临床意义
生理性变化:夜间高,上午波动大,运动和刺激使之减少
病理变化:
嗜酸性粒细胞增多(>0.5×10*9/L)
超敏反应性疾病(支气管哮喘,荨麻疹,食物过敏)
寄生虫(感染蛔虫,钩虫,肺吸虫)
某些皮肤病(银屑病,湿疹,真菌性皮肤病)
血液病(慢性粒细胞白血病)
某些恶性肿瘤(淋巴系统的如霍奇金病)
某些传染病(唯猩红热增高)
某些内分泌疾病(脑垂体功能低下)
嗜酸性粒细胞减少(<0.05×10*9/L):伤寒,大手术后严重组织损伤等
其他应用:用于观察急性传染病的病情及预后判断,观察大手术和烧伤病人预后的指标,判断垂体或肾上腺皮质功能
血小板检验
血小板计数
血小板生理
PLT来自骨髓内巨核细胞,寿命为7-14,全身约1/3的血小板储存在脾脏
血小板的大小约为红细胞的1/3-1/5,直径2um-5um
在不染色标本中血小板在高倍镜下观察为,圆形,椭圆形或呈杆状,胞浆带有淡绿色的折光
血小板功能
黏附,聚集,释放,促凝,血块收缩等
血小板大量聚集黏附于血管破损处,形成白色血栓止血
操作步骤
加稀释液 草酸铵稀溶液(破坏红细胞),采血和加血,稀释静置10分钟,充液,计数,计算(PLT/L5个中方格PLT×10*9/L)
方法评价:流式细胞仪法
质量控制:避免血小板被激活,破坏,避免杂物污染是血小板计数的关键
参考区间:(100-300)×10*9/L
临床意义
生理变化:午后,冬季,高原居民,分娩,运动,饱餐,静脉较高
病理变化
血小板减少是引起出血的常见原因,超过400×10*9/L为血小板增加
血小板减少
生成障碍:造血功能障碍(再障,急白,急性放射病)
破坏消耗增增多:系统性红斑狼疮,DIC(弥漫性血管性溶血)
血小板分布异常:脾肿大,血液被稀释
血小板增多
原发性增多:骨髓增殖性疾病(真性红细胞增多,原发性血小板增多症,骨髓纤维化早期,慢性急性失血溶血后
反应性增多:急性感染,溶血,某些癌症患者
血小板形态检查
正常血小板形态:两面微凸的圆盘状,直径约1.5-3um,在血涂片上散在或成簇分布,多为圆形,椭圆形或略欠规则形,胞质呈淡蓝或淡红色,有细小分布均匀而相聚或分散于胞质中的紫红色颗粒
异常血小板形态
大小异常
大血小板:直径4-7um,巨型血小板直径7-20um
小血小板:直径你<1.5um,见于缺铁性贫血,再生障碍性贫血
形态异常
血小板可以出现杆状,逗点状,蝌蚪状,蛇形和丝状突起等
聚集性和分布异常
聚集和分布状态可间接反映其功能,聚集与散在的血小板之比为20:1
血小板卫星现象:血小板黏附,围绕于中性粒细胞周围的现象。因EDTA和免疫球蛋白相互作用,非特异性结合血小板之故,被抗体包被的血小板与中性粒细胞结合。是血液分析仪血小板计数假性减少的原因之一
血小板片状聚集,血小板减少,血小板功能异常