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生物制品生产的基本技术
生物制品生产的基本技术：包含化学危险品：直接或间接对人体有害的物质,具有一定危险性。，财产损毁的物品均为化学危险物品。 等等
编辑于2022-05-25 23:02:57- 生物制品生产的基本技术
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第二单元 生物制品生产的基本技术
无菌操作技术
培养基制作
每组： LB液: 50mL LB固: 100mL 称量→溶解一调pH- (过滤)→分装→加棉塞->包扎→高压蒸汽灭菌
培养基的倾倒和分装
1、液体培养基分装到试管 2、液体培养基分装到三角瓶 3、固体培养基倾倒平板
接种
①从eppendorf菌种管接种到试管 ②液体试管菌种转接试管或三角瓶 ③液体试管菌种接种到平板培养基 ④平板菌种接种到液体试管或三角瓶 ⑤穿刺接种
分离
①平板划线法 ②平板倾注法 ③平板涂布法
菌毒种选育
概念
凡应用于生物制品既疫苗、类毒素、免疫血清及诊断制剂等的生产、鉴定和研究的所有细菌种、毒种以及分类地位上在原虫以下的生物种都属于生物制品的菌、毒种范围。
分类
①生产用的菌(毒)种 (1)直接生产用的菌(毒)种 (2)免疫用的菌(毒)种 (3)加工用的菌(毒)种 ②工具菌(毒)种 ③检定用的菌(毒)种 ④标准菌株或参考菌株
一般要求
①来源清楚,资料完整 ②生物学特性典型 ③血清型相符 ④遗传性状稳定纯一 ⑤毒力在规定范围内
鉴定
1、致病力测定 菌(毒)种的致病力(或称毒力)常用易感实验动物、本动物(原宿主动物) 、禽胚或细胞进行测定,用半数致死量(LD50) 、半数感染量(ID50) 、禽胚半数致死量(ELD50) 、胚半数感染量(HD50) 、组织细胞半数感染量(TCID50)等来表示。 方法: 将培养物连续递进稀释,将不同的稀释度定量接种一定 数量的动物(禽胚或细胞) ,统计被接种动物在规定时间内的发病或死亡数(细胞病变数) ,按Reed-Muench 法计算半数剂量,数字越小说明致病力越强。
抗原性测定
稳定性测定
选育
强毒菌： 病料采集→病原分离→纯粹检验→鉴定（致病力、抗原性、稳定性)→筛选出毒力弱、抗性好、性状稳定的菌(毒)株→增殖→冻干保存
弱毒菌： 1)利用病原自然弱毒株 2)选择异源毒株 3)人工致弱强毒株 (1)物理途径:高温、干燥、射线等 (2)化学途径:亚硝基胍、醋酸铊 （3)生物学途径: ①适应钝感动物(非自然宿主) ②适应钝感禽胚 ③适应细胞 ④杂交减毒 (4)基因工程途径
自然弱毒株分离(间源株、异源株)→强毒林人工致弱→初选→鉴定（致病力、原性、稳定性)→筛选出毒力弱、抗性好、性状稳定的菌(毒)株→增殖→冻干保存
细菌培养技术
培养基的制备
原料
分类
①生产工艺的要求和作用： 孢子、种子、发酵 ②营养物质来源： 天然、合成、半合成 ③培养基物理状态： 液体、固体、半液体 ④培养基的用途： 基本、完全、鉴别、选择
培养基的制备
细菌培养技术
细胞的繁殖规律
生产条件
营养条件
水、碳源、氮源、盐类、生长因子
环境条件
气体、温度、PH
好氧菌的分离培养
划线菌接种法
分区划线法
连续划线法
倾注培养法
使用该方法前，样品通常要预处理。
利用平皿的生化反应进行分离
通过控制培养和培养条件进行分离
培养基的营养成分
培养基的PH
排除不需要的菌类
控制温度
厌氧菌的分离培养
厌氧缸法
将接种细菌的培养皿置于容量为2000mL的磨口标本缸或干燥器内,点燃一支蜡烛直立于缸中,烛火距约缸口10cm ,缸盖和缸口涂以凡土林,密封缸盖。蜡烛熄灭后,将容器置37℃的温箱中培养。
厌氧袋
厌氧产气袋能够将密闭空间中的氧气完全吸收掉，然后产生二氧化碳 操作方法:将接种细菌平板的置于不小于2.5升的容器中，然后把产气袋外包装剪开后放入容器，密封后于37℃培养。
厌氧手套/操作箱
抽真空 充氮气 钯催化 (氢) 干燥剂 吸水
厌氧盒
同理厌氧袋
生物耗氧法
5)生物耗氧法:在一密闭的容器内放以生物(多是植物)消耗氧气,同时产生二氧化碳,供细菌生长用。
化学厌氧培养法
焦性末食子酸法、李霍夫氏法、硫乙醇酸钠法
厌氧培养基法
疱肉培养基
细菌的规模化培养
1、种子接种量:接种量要合适,一般1%-2%. 2、培养时间:根据生长曲线而定,一般在对数生长期末。 3、培养方法: 固体培养基表面培养法:用于制备抗原、灭活苗苗或冻干苗苗。 2)液体静置培养法:适于一般菌苗的生产。 3)液体深层通气培养法:适于大量的培养,菌苗生产中的主要培养方法。 4)透析培养法:培养物与培养基之间隔一层半透膜的培养方法
注意问题
1)补充营养物质 2)通气供氧: 3)控制培养基pH 4)调节培养温度 5)控制污染：
制备流程中应补充问题
①如果是初分离菌种，应加鉴定 ②油乳剂疫苗乳化后应有检测
病毒的禽胚培养
总体介绍
病毒的复制、增殖与营养
生活史： 吸附（37℃最佳） 侵入 脱壳 生物合成 装配 释放
生长曲线
病毒的组织（动物）培养技术
动物的选择
五项标准: 1)大动物来源于非疫区,最好是未接种过相应病毒疫苗的青年和健康 2)对相应病毒易感,并十分敏感; 3)经隔离饲养、观察证明健康; 4)家兔、鼠类等小动物应符合普通级或清洁级实验动物标准 5)体重、年龄基本一致,遗传特性相似,个体差异小。
动物接种方法
1)皮下接种(注射) 2)皮内接种(注射) 3)静脉接种(注射) 4)腹腔接种(注射) 5)肌肉接种(注射)
动物接种后的饲养管理和收获病毒
①提供良好的饲养条件 ②每天观察和检查规定的各项指标 ③出现符合要求的症状后,按规定方法取其含毒量高的组织脏器。
病毒的禽胚培养技术
鸡胚选择
理想的禽胚是SPF鸡胚，常以非免疫鸡胚补充
禽胚的接种前孵育
接种方法
1)绒毛尿囊膜接种 2)尿囊腔接种 3)卵黄囊接种 4)羊膜腔接种 5) 脑内接种 3)胚体接种法,同脑内接种,只是把针头刺入胚体内 4）静脉接种法
后孵育
接种后,蜡泪封孔,置37℃下孵化,每天照蛋2次以上,通过禽胚的病变初步确定病毒的存在及增殖情况,淘汰24h内死胚。 病毒感染指症:死亡,充血、出血或出现坏死灶,畸形,出现痘斑。
收获
5、收获 弃去接种24小时内死亡的胚蛋, 24小时后死亡的胚蛋随时取出,放4～8℃冷冻4～24小时,收获含病毒的尿囊液、羊水、绒毛尿囊膜、卵黄囊、胚体。
影响禽胚培养病毒的因素
1)种蛋质量的影响 ①经垂直传播而携带的病原微生物。 ②种蛋带有母源抗体。
2）孵化技术的影响 ①温度 ②湿度 ③通风 ④翻蛋
具体方法
鸡卵的保存、孵育及检卵 ①保存:孵育前,保存的最佳室温在10℃左右,最多不能超过10d. ②鸡蛋选择:选健康无病鸡群的新鲜受精蛋。 ③孵育:孵化时以孵卵箱较好,培养细菌的温箱也可以用,相对湿度为60%左右(45%～60%) ,温度一般37.3～37.8℃,每日翻蛋最少3次。 ④检卵:孵后第4d开始用照蛋器检查发育情况,检出未受精及死亡鸡胚,剔除。
尿囊腔接种
①孵育9～11日龄的鸡胚,经照视后,划出气室及胚胎位置,标明胚龄及日期,气室朝上立于卵架上。 ②在气室中心或远离胚胎侧气室边缘先后用碘酊棉球及酒精棉球消毒、以钢锥在气室的中央或侧边打一小孔,针头沿孔垂直或稍斜插入气室,进入尿囊,向尿囊腔内注入0.1～0.3m新城疫病毒悬液,拔出针头,用融化的石蜡封孔,直立孵化。 ③孵化期间,每晚照蛋,观察胚胎存活情况。弃去接种后24h前死亡的鸡胚。 ④收获:时间须视病毒的种类而定,如新城疫病毒在接种后24～48h即可收获毒。 (1)收获前将鸡胚置于0～4℃冰箱中泠藏4h或过夜,使血管收缩,以免解剖时出血。 (2)气室朝上立于卵架上,无菌操作轻轻敲打并揭去气室顶部蛋壳,形成直径为1.5～50px的开口。 (3)用灭菌镊子夹起并撕开气室中央的绒毛尿囊膜,然后用吸管从破口处吸取尿囊液,每胚约可得5～6ml,贮于无菌小瓶内,无菌检验后,冰冻保存,作种毒或试验之用。
卵黄囊接种法
①选用6～8日龄鸡胚,划出气室和胚胎位置,垂直放置在固定的卵架上。 ②用碘酊及酒精棉消毒气室端,在气室的中央打一小孔,针头沿小孔垂直刺入约75px,向卵黄囊内注入0.1～0.5ml病毒液。 ③拔出针头,用融化的石蜡封孔,直立孵化3～7d。 ④孵化期间,每晚照蛋,观察胚胎存活情况。弃去接种后24h内死亡的鸡胚。 5收获: (1)将濒死或死亡鸡胚气室部用碘酊及酒精棉消毒,直立于卵架上。无菌操作轻轻敲打并揭去气室顶部蛋壳。 （2)用另一无菌镊子撕开绒毛尿囊膜,夹起鸡胚,切断卵黄带,置于无菌器皿中。 (3)如收获鸡胚,则除去双眼、爪及嘴,置于无菌小瓶中保存。 (4)如收获卵黄囊,则用镊子将绒毛尿囊膜与卵黄囊分开,将后者贮于无菌小瓶中。 （5)收获的鸡胚或卵黄囊,经无菌检验后,放置-25℃冰箱冷冻保存。
绒毛尿囊膜接种法
①选9～12日龄鸡胚,经照视后划出气室位置并消毒。 ②在胚胎附近略近气室处,选择血管较少的部位以磨卵器磨一与纵轴平行的裂痕或将蛋壳锉开成三角形,小心挑起卵壳,造成卵窗,见到白色而韧性的壳膜,以针尖小心挑破壳膜,注意切匆损伤其下的绒毛尿囊膜。 ③另外在气室的顶端钻一小孔。 ④在卵窗壳膜刺破处滴一滴无菌生理盐水,用橡皮乳头紧贴气室小孔,向外吸气,使卵窗部位的绒毛尿囊膜下陷形成一小凹。 ⑤除去卵窗部的卵壳,用注射器或吸管滴入2～3滴病毒液于绒毛尿囊膜上。 ⑥用透明胶纸封住卵窗,或用玻璃纸盖于卵窗上,周围用石蜡封固,同时封气室 ⑦接种部位朝上横卧孵化,不许翻动。每日自卵窗处检查,约经48～96h,病变发育明显,鸡胚可能受感染死亡。端小孔。 ⑧收获: (1)用碘酊消毒卵窗周围,用无菌镊子扩大卵窗至绒毛尿囊膜下陷的边缘,除去卵壳及壳膜,注意匆使其落入绒毛尿囊膜上。 (2)另用无菌镊子轻轻夹起绒毛尿囊膜,用小剪刀沿人工气室周围将接种的绒毛尿囊膜全部剪下,置于灭菌的平皿内,观察病变。病变明显的膜,可放入小瓶中保存。
羊膜腔接种法
①选12～14日龄鸡胚,经照视后划出气室位置并消毒,按绒毛尿囊膜接种法造成人工气室,撕去卵壳膜,用无菌镊子夹起绒毛尿囊膜,在无大血管处切一12.5px小口。 ②用灭菌无齿弯头镊子夹起羊膜,针头刺破羊膜进入羊膜腔,注入新城疫病毒液0.1～0.2ml。 ③用透明胶纸封住卵窗,或用玻璃纸盖于卵窗上,周围用石蜡封固,同时封气室端小孔。 ④横卧孵化,不许翻动。每日检查发育情况, 24h内死亡者弃去。通常培养3～5d。 ⑤收获方法 (1)用碘酊消毒卵窗周围,用无菌镊子扩大卵窗至绒毛尿囊膜下陷的边缘,除去卵壳、壳膜及绒毛尿囊膜,倾去尿囊液。 (2)夹起羊膜,用尖头毛细吸管或注射器穿入羊膜,吸取羊水,装入小瓶中冷藏。每卵约可收获0.5～1ml。
病毒的细胞培养技术
细胞的标准 易感、无外源性微生物污染 ①宿主动物细胞 如,猪甲状腺细胞培养猪传染性胃肠炎病毒 ②非宿主动物细胞 如,鸭胚成纤维细胞培养马立克氏病病毒。
影响病毒在细胞中增殖的因素 (1)血清 维持液中血清含量:一般不超过2% (2)温度 最适温度多为37℃。 有些病毒生长的最适温度高于或低于37℃ 。如,狂犬病病毒为32℃ （3） pH 维持液PH值一般为7.6-7.8 (4)接毒量 维持液体积的1%-10%,科学的接种量应以TCID50为依据。 (5)接毒方法 ①异步接毒 细胞长成单层后倒去生长液,接种病毒, 37℃吸附一定时间后加入维持液,多数病毒采用此种方式。 ②同步接毒 在种植细胞的同时或种植4小时内接种病毒,主要用于在细胞有丝分裂盛期进行复制的病毒,如,细小病毒。
病毒增殖的判断指标 细胞病变效应(CPE ) ①细胞圆缩 ②细胞聚集 ③形成合胞体 ④轻微病变
病毒的收获 ①一般在CPE达80%左右时收获。 ②通过冻融、超声波等方式破碎细胞,使病毒充分释放,再去除细胞碎片。 ③病毒液于-20℃以下保存。细胞结合型病毒,收获感染细胞直接于液氮中保存。
包装技术及安全防护
生物制品生产中的安全防护技术
化学防护技术
概述
化学危险品：直接或间接对人体有害的物质,具有一定危险性。 如:具有燃烧、爆炸、毒害、腐蚀、放射等危险,定条件下能一起燃烧、爆炸、导致人体中毒、灼烧、死亡的事故和财产损毁的物品均为化学危险物品。 管理:化学危险物品都具有不同程度的危险性,如果使用不当或管理不善,很容易引发各种事故,造成人员死亡或财产损失,因此必须加强对化学危险品的管理。
爆炸品
①分类 物理性爆炸:生产中使用的气瓶、反应锅、充气钢瓶等,当内部压力超过其所能承受的压力时,就会爆炸。 特点:只发生物态变化,不发生化学变化。 化学性爆炸:物质高速燃烧,产生大量气体和能量,气体聚然膨胀产生很大压力而引起爆炸。 能引起爆炸的化学物品:苦味酸、二硝基苯等。 混合气体爆炸:当氢气、乙炔、丙酮、氨气等于空气混合达到一定比例时遇火就会爆炸。如:氢气与空气比达到4.1%～74.1%时,遇明火则爆炸,若氢气与空气含量少于4.1%或大于74.1%时则不会爆炸。 ②预防爆炸事故的措施 严格执行化学危险品的使用和储藏制度以及各项安全操作规程。 注意: ⒈不要随意将两种或多种化学物品混合。 ⒉使用不溶于水而挥发性强的有机溶剂,如乙醚、石油醚、苯、甲苯和二甲苯等,必须注意房间通风,防止挥发性气体聚集,室内使用明火。使用后的残液不得随意倒入下水道,因为它们会浮在水面并挥发,遇明火就会造成火灾。 ③受压容器:必须严格执行定期技术检查和鉴定制度,盛装易燃易爆液体的铁制容器和各类气瓶必须轻装轻卸,不得擅自更改钢印和各种颜色标记,严禁抛、掷,以防摩擦、撞击而引起爆炸,容器不要放在明火或加热器附近。 ④钢瓶每次用完后要检查开关是否拧紧,严防漏气。保证室内上层窗户开启,加强通风。钢瓶气体不得用尽,必须留有剩余压力,一般不得小于0.55mpa;消除电器火花,在有燃烧、爆炸危险的生产厂房及仓库内安装动力电机和照明电器设备时,必须遵守电器安全规程,采取相应的防爆措施。
易燃品
2易燃品的安全使用与防护 ①使用易燃品的设备、容器、根据毒害程度,其装置必须有排气和通风装置,要有防爆、防火等措施。 ②盛装低沸点有机溶剂的容器,如乙醚、丙酮、甲醇、苯、二甲苯等,因有机溶剂在夏季容易挥发,易在容器内出现蒸汽。故在打开容器时,必须慢慢的先打开一点小缝隙,让容器内的气体从小缝出来,然后再把盖子完全打开。如果猛然打开瓶盖,容器内的气体一下子冲出来灼伤人体,并引发火灾。使用完毕后,应将其防止温度较低的库房或冷库中,切不可放置在普通的冰箱内,可放在防爆电冰箱。 ③低沸点有机溶剂不能盛装在透明无色的玻璃瓶内,因在阳光照射下,玻璃就会像凸透镜一样,把阳光聚在瓶外外附近交点处,如果遇到纸、草、木箱等易燃物即着火燃烧,引起火灾。所以,一般都把易燃品放在背阳光的地方,用棕色瓶盛装,或在瓶子包上一层黑。 ④当必须对易燃液体进行回流与蒸馏时,应根据液体沸点选用适当的加热方法,严禁用明火直接加热,如沸点少于56℃者采用预先加热的热水加温;沸点在50～100℃者,采用水域加温;沸点在100-240℃者,用沙浴、油浴加温等。操作过程中,必须严格控制温度和时间。 ⑤性质相抵触的工作项目(如可散发易燃气体和用火操作)应分开进行,严禁同时操作。
腐蚀品
腐蚀性化学品的安全使用与防护 强酸、强碱属腐蚀性物质,可能对人体造成严重灼烧。 注意: ①酸、碱操作时,一定要穿戴防护用品。 ②当被酸、碱灼伤后,要就近尽快用清水冲洗,冲洗的水量要大,时间要在15min以上或更长时间,然后去医疗单位处理。 3腐蚀物品放置的高度应不超过工作台顶,以减少在发生破裂或溅出时对面部或上躯的伤害。 ④敞开的架子上只能存放常用的最小量的腐蚀物品。 ⑤在高温或夏季,使用易挥发的试剂时,要将试剂瓶适当冷却后盖上湿布再打开,且瓶口不能对着自己或他人。 ⑥搬运大瓶酸碱或腐蚀性液体时要注意容器有无裂纹,外包装是否牢固。
有毒物品
有毒物品的安全使用与防护 1)防止生产性毒物进入人体 毒物:经呼吸道、皮肤、消化道等途径进入人体,引起危害。 气体、蒸汽、探发性液体和粉木状的毒物均可以经呼吸道进入人体。 由于肺泡呼吸膜极薄,呼吸膜的扩散面积很大,毒物可迅速通过，进入循环扩散人体各个部位引起全身性中毒。大部分生产性毒性由此进去人体，如氯气、汞蒸气、氯化物等。 2)毒物的保管与领用 毒物应放在保险柜内,双人双锁保管,用多少取多少，并将每次用量登记在专用簿上定期核对。
放射性物品
1)放射性对人体的危害 人体长期受超剂量电离辐射,可出现全身慢性损伤,主要表现:神经衰弱、造血功能抑制、牙出血、皮肤及粘膜出血、毛发脱落等,部分患者可出现性功能障碍和精神障碍。如果在允许剂量范围内工作,对人体没有在何危险,因为,机体对射线的损伤作用有一定的适应和修复能力,在允许的低剂量照射下,机体的修复能力占优势，再加上操作中注意防护,这种危险性可进一步减少到对人体无害。 2)放射性实验室的建筑要求及室内设施地址选择：考虑周围环境的安全,一般设在建筑物底层的一端或一层,与非放射性工作室分开,有单独出入口。总平面设计应按放射性水平,由低放区到高放区,不可相互交叉。废水的流向和通风系统,有清洁区流向活性区,不逆向倒流。在污染的周围,要建大于50m的防护检测区,定期检测。 3）放射性物品的安全操作与防护 ①严格执行操作规则 ②控制发射源的质与量 ③减少照射时间 ④加强距离防护 ⑤加强屏蔽防护
除污保洁
①正常污染的清除,指操作过程中有计划的对污染的实验容器和工具进行除污,可利用合成洗涤剂除污。 ②事故性的污染的清除,指在非计划内发生的污染除污。 ③对误服放射性物质人员的处理,是在未吸收前使用含漱、洗胃、催吐等方法,加速排除,对已吸收者,视放射性物品性质选用触排剂,如误服后,可用碘化钾促排。 用具要求:在操作过程中,要贯彻清污分明原则,对放射源和配好的制剂都要标记清楚,放射性废物分开并标记。
个人操作时的防护: ①防止由呼吸道进入人体内。避免空气受放射性污染,不用或少用干式操作,多用湿式操作或尽量在密闭容器内噪作,防止飞溅而污染空气;加强通风排风,降低空气中放射性物浓度;穿戴呼吸道防护器材,如纱布或特制防护口罩。 ②防止放射性物由口进入人体内。工作场所内不可进食和吸烟,严禁用嘴直接接触污染工具。佩戴口罩时不要把嘴暴露在外呼吸;操作时应戴防护手套,工作结束后应注意清洗手部。 ③防止由体表进入体内,操作时应在垫有滤纸的盘内进行,防止贱泼;要穿戴防护器材。
废物处理
放射性废物的处理 ①稀释排放:放射性低的废水,其放射性不超过露天水资源中限制浓度的100倍,按国家规定可排入下水道。低放射性的气体和气溶胶,可通过高出周围150m2内建筑物3m以上的排气烟囱排入大气,经大气扩散稀释后,浓度可低于相应的限制浓度。 ②放置衰变法:对半衰期较短(T½<30d)的固体或液体放射性废物,集中放置大约10个半衰期后,可按一般废物处理。 ③浓缩储存法:对半衰期较长的固体或液体放射性废物,可先设法缩小体积,然后将浓缩的废物封容器, 由统一管理部门,定期收集,集中分类储存。
生物学防护技术
微生物的来源
在感染性疾病中,依病原体来源可分为外源性感染和内源主感染。 ①内源性感染是指病原体来自病原体本身,这主要是体内的正常菌群感染,当机体免疫功能降低或正常菌群平衡失调时引发二重感染;外源性感染则是指病原体来自感染者体外,包括患者、带菌者、带菌动物及外界环境。 ②生物制品生产中的获得性感染属于外源性感染,由于治病微生物种类繁多,所引起的感染也是多种多样。一般可以分为细菌性感染、病毒性感染、真菌及其他微生物感染、寄生虫感染四大类。不同种类生物制品的生产由于其生产条件和方式的不同,容易发生的获得性感染也不尽相同。
感染途径
病原微生物可通过一种或数种途径传播,在临床上传播的途径主要有经呼吸道、消化道、接触传播。而生物制品生产中感染的机会要更多,如要在微生物接种、转钟、培养时刻被感染。所以对于从事生物制品生产的工作人员来讲,感染的可能性更大,一般的感染途径有以下几种。
接触感染
是指工作人员接触病原微生物后被感染。如操作不慎被注射器针头刺伤、被玻璃或手术刀划伤、创伤等均可造成病原微生物在创伤处的直接“接种”感染。另外,飞溅与溢出接触也是常见的接触感染途径。由于操作不慎容易使物品飞溅或喷洒到脸上和眼上而感染,如开启菌液瓶,菌液飞溅至眼中引起眼部感染性疾病。还有在操作过程中含有微生物的溶液有可能从容器中溅出或溢出,这都是感染的常见途径。当菌液溅出后可能通过,接触后转移至嘴发眼中 正常完整的皮肤黏膜是阻挡微生物进入机体的第道防线在操作过程中割伤、划伤皮肤时病原菌通过皮肤粘膜进入机体引起感染。
动物咬、抓伤及昆虫媒介
动物咬、抓伤时, 由于人体皮肤黏膜屏障被破坏,工作环境中的病原体或者动物体液中病原体可通过伤口比较容易的进入机体,这也是获得性感染的途径之一,如狂犬病病毒就是通过动物咬、抓伤进行传播的。由于有些生物制品的生产不可避免地要接触动物活体,因此,正确的处置动物是避免这类事故发生的关键。昆虫媒介也是重要的感染途径,如乙型脑炎传播以蚊子为媒介,实验室中感染病原体的蚊子、苍蝇、蟑螂等昆虫都可能是实验室感染的媒介。
经呼吸道吸入
通过这种途径获得的感染,多是污染物以气溶胶的形式悬浮在空气中,人吸入了这样的空气导致的。生物制品生产中经常可以发生这种情况:在快速排出移液管或者取样器内的液体时,液体在压力作用下,通过小嘴或喷嘴喷散在固体表面,聚集成为非常小的气雾状颗粒。形成气溶胶,亏染工作者周围的空气。呼吸了这样的空气就容易感染相应的病原菌。 另外人们在咳嗽、喷嚏时,均可以产生含有多种病原体的气雾污染物,一般也称为气溶胶污染。气溶胶是以液体状态悬浮在大气中的液体颗粒,以这种方式产生的飞沫颗粒大小不一,其颗粒大小与危害程度密切相关,较大的飞沫沉降迅速,污染物体表面,容易发生接触性或者经口感染;较小的飞沫,一般不易沉降或沉降较慢,但是可以长时间储留在空气中,容易经呼吸道引发感染。
生物制品生产中经常产生的气溶胶有三种
核滴
干粉
浮尘
经口感染
虽然许多疾病都是通过消化道传播(经口感染)的,如痢疾、霍乱,但在生物制品生产中,这样的机会并不多见。但是当工作人员采用一些不提倡的操作方法,如用口吸移液管或者在可感染区域内违反规定发生吃、喝、抽烟等行为时,感染的机会就增加了。特别是在发生了感染性物品溢出或者飞溅后没有得到及时安全的处理时,经口感染就变得非常容易发生了。
生物感染的防护
为避免意外感染,降低生物制品生产中感染的发生率,必须以预防为主。预防的原则为“切断传播途径,控制传染源,保护易感人员,提高人员免疫力”。
严格执行实验室操作规程。
安装安全防护设备。
个人防护
呼吸道防护
手部防护
眼及脸保护
工作环境定期消毒 ①房间定期用紫外线消毒,用具应定期进行灭菌,不同用具可选用不同灭菌方法,如高压蒸汽、干烤箱等。 ②如果工作人员按操作规程正确操作,佩戴防护用具,就可避免事故发生。
常用生物制品生产安全使用技术
不同的实验室有不同的要求
吸管的使用 ①最好使用标准吸管。 ②不要用嘴吹吸吸管。 ③吸管一头加棉以减少附件污染。
离心机使用 ①检查设备材料。 ②按说明书进行。 ③离心管要对称。 ④装有感染性溶剂的试管要盖盖与其他物质分开离心。
安瓿 ①应该在安全柜中开启。 ②破碎的安瓿及破碎的玻璃视为污染进行处理。
冰箱、冰柜、恒温箱的使用和技术 ①在清理的时候要戴好手套。 ②对温度进行监测和记录。 ③商物质必须有标签包括名称，日期。 ④冰箱内不得存放，有易燃物品和挥发性物品。
生物安全柜的使用技术 只有将挡风扇开着、气流在安全的位置时安全柜方可使用。
血清分离技术 ①吸管必须在消毒剂中浸泡过夜。 ②溅出或溢出的血液等感染性材料应用次氯酸钠消毒。
匀浆器和振荡器的使用技术 所有瓶和杯都应该有盖。
生物制品中的废物处理
固体废物 主要是产生中的固体辅料和各种材料废弃物。处理要按照以下程序进行. 1)集中放置 (有明显隔离带的废物堆放区,分类标记后分门别类放置 2)分类储存 按照Ι、Π、Ш类做好分类记录,并标出其危害程度、入库和规定出库时间。 3)分类处理 按照有关规定对不同类别废物遵章处理。应体现“早进早出”的时间优先原则。
2.液体废物 1)集中存储 经各种收集管路集中与专门储存区域,等待处理。如果液体废物混合后毒害作用增大,则必须分别储存。 2)处理方法 生物法、物理法、化学法、物理化学法。
感染性废物
感染性废物:含有致病性病原体的废物。 处理目的:避免因接触而被感染 注意:不应与一般废物、危险性废物混合、以其产生特点分流、感染性废物需分门别类,用相应的方法处理。 1)有病原微生物的废物处理 用消毒液充分浸泡后,在密闭容器内彻底粉碎,最后高压灭菌消毒。 2)脏器废物处理 先经高温蒸煮后,然后粉碎或者匀浆化,最后高压灭菌消毒。
非感染性废物 可按固体废物、液体废物做相应处理。
血液制品
血液制品处理 静脉材血后的棉签、棉球回收后集中焚烧;装标本的试管和容器,应防止渗漏和溢洒的装置运输并灭菌处理:采血用的注射器经初步消毒后再清洗:一次性使用的注射器需进行无害化处理:采血浆用的一次性血浆袋、输血器用后应烧毁。
注意事项
1)塑料袋用于不锐利、不受潮的感染性废物处理。高压灭菌时,不影响蒸汽向废物内的渗透,废物处理、转运、储存时不易破裂、泄漏、溢出。 2)其他材料金属、硬塑料、瓦楞纸、纤维板和玻璃等材科常用于制作成装废物的容器。其特点:坚固、持久等。 3)盛液体的容器 液体应该装在密封良好的容器内,以免在运送、处理过程中泄漏,溢出。容器不宜太大,装废液的容器外层最好有层包装 4)放尖锐物的容器 装碎玻璃、刀片、针头、注射器等废物的容器应该坚固、密封，以防穿透刺破，容器上应有几个通风孔，高压灭菌时以便蒸汽进入。
标记的注意事项
①为了便于识别装感染性废物的容器,贴标和做记号表示,红色、橘黄色或橘红色常用来表明生物危险性。标签的另一功能就是对感染性废物分门别类,以便明确用哪种方法处置。对于运往他处消毒处理的感染性废物应标明废物名称、产地和联系电话是必不可少的。往往用醒目的颜色、标签和标记。 ②处理的注意事项生活垃圾必须与生产废物严格区分。生活垃圾用黑色污物袋。传染性废物用黄色污物袋盛装。放射性废物用红色污物袋盛装固体污物通常用焚炉焚烧,可堆放在一个允许的地方,液体污物经过处理后可倒下水道
生物制品的污水处理
种类
含病原微生物的污水
主要是微生物培养后的废弃物,以及在用活菌病毒攻击实验动物的饲料观察期内动物的排泄物和冲洗用水。其中均含有病原微生物,可引起疾病的传播、流行病的爆发,甚至人的死亡。
有机污水
生产血液制品时,清洗过生产系统和设备的水中含高蛋白质,容易腐败,使水产生臭味,恶化水质。
放射性污水
放射性污水 在放射性同位素操作中的洗涤用水,含有放射性同位素,会对人体产生全身性的损伤。 污水处理的常用方法 目的:将污水中的污染物分离出来,或将其转变为无害物质,使污水得到净化。
净水处理设备中的离子交换树脂再生液、反渗透膜洗液、实验室中的酸性洗液等酸碱污水排入环境水中,会使水的PH发生改变,影响水体本身的缓冲作用,破坏水生态系统。
方法
物理方法
利用物理作用杀灭污水中的病原微生物,分离污水中呈悬浮状态的污染物质。在处理过程中不改变污染物的化学性质。 处理设备有:反应罐、沉淀池等。
化学方法
化学法
中和处理法
消毒灭菌法
混凝处理法
化学沉淀法
生物方法
活性污泥法
生物膜法
厌氧生物法
生物制品的包装、保存与运输
生物制品的包装
包装的目的和作用
包装的目的: 包装:适当材料制成、成品相适应的容器-分配和组合-运输、保管和销售。 包装:保护商品质量和数量,免受外来因素影响。 生物制品系活性物质活性:受光、热、空气水分和微生物破坏,良好包装显得尤为重要。 预防制剂、治疗制剂或诊断制剂,各有其特殊要求。 通过包装:用文字形式传递信息给医生、技术人员、经销人员和使用者,正确地为需要者所使用。 因此各种生物制品在制成后如不通过包装工序,就无法成为有价值的商品,也就无法达到防病治病的最终目标。
包装的作用 ①防止劣化变质 ②防止破损 ③防止侵入和泄露 ④构成商品，促进销售 ⑤物流合理化
方便使用 ①单元化包装 ②多剂量包装 ③组合包装
包装材料和容器
药用玻璃容器
安瓿
西林瓶
塑料容器
主要成分是各种树脂，树脂又一些有机化合物单体聚合而成。
纸容器
纸盒、纸箱、纸筒
缺点 易渗漏易燃和易长霉
橡胶塞
瓶装生物制品，常用橡胶塞封口
生物制品的分装
分装容器准备
①清洗 ②干燥灭菌
罐装和封口
100级净化室无菌条件下进行。
注意事项
①有相关部门的检查和认定。 ②标签必须明确完整。 ③要注意无菌操作。 ④尽量在原容器内直接分装。 ⑤不时搅动，使制品混合均一。 ⑥随时熔封，避免污染或吸潮。 ⑦在适宜的温度下进行。 ⑧不同批号、种类的制品不得同时分装，要分开。 ⑨得到质量管理部门的包装通知单后进行贴签包装。 ⑩要进行试漏检验。
包装的管理
分装车间的要求
清洁区的位置选择
安静、干净
清洁区的布置
整洁、无污染源
清洁区的管理
①严格更衣后才能入内 ②每周室内消毒，每天擦拭消毒 ③洁净室主要监测项目：温度、湿度、空气压力 ④高效过滤器：每年检测一次风量
分装设备、用具的要求
①按GMP和《中国生物制品规程》进行 ②要健康人员，活动性结核病、急性传染性肝炎、乙型肝炎表面抗原携带者，不能参与分装
生物制品的保存与运输
生物制品的保存与运输温度
多数生物制品对温度敏感，按《计划免疫工作技术管理规定》进行
冷冻干燥技术
冷冻干燥:溶液低温干燥一降低温度水溶液冻结→水的蒸汽压力降低,难以挥发→降低气压→使结成冰的水直接升华成为水蒸气→使其附着于一个温度更低的金属表面→再凝结成冰→使活性物质中的固态水分不断升华,不断凝结在冷凝器上,直至干燥。
优点
①可避免药品因高热而分解变质; ②所得产品质地疏松,加水后迅速溶解恢复药液原有的特性; ③含水量低,一般为1%～3%。干燥在真空中进行,不易氧化,有利于产品长期储存 ④产品中微粒物质比用其他方法生产时少,因为污染机会相对减少 ⑤产品剂量准确,外观优良
缺点
①溶剂不能随意选择,故要求制备某种特殊的晶型; ②有时某些产品重新溶解时出现浑浊。 ③本法需采用特殊设备,成本较高。
冷冻干燥工艺
冻结
速冻法
慢冻法
第一次干燥
第二次干燥
保护剂的作用
分类
渗透剂
DMSO、甘油、蔗糖
非渗透剂
PVP、蛋白质
效用
①对生物活性物质 ②对活细胞