蛋白质复性

这是一篇关于蛋白质复性的思维导图，主要内容有性质、形成、形成的抑制、优势、分离纯化和溶解等。

蛋白质复性

• 包含体
  • 性质
    • 包含体是高密度蛋白质聚集体，一级结构是正确的，但立体结构是错误的
    • 通常位于细胞质，一些分泌蛋白可能在外周胞质
  • 形成
    • 蛋白质过量表达
    • 新生肽链的聚集速率超过蛋白质正确折叠速率
    • 蛋白质折叠过程中缺乏酶和辅助因子
  • 形成的抑制
    • 降低细胞培养温度，抑制蛋白质表达速度
    • 弥补蛋白质表达过程的辅助因子
    • 使用非代谢性碳源降低代谢速度和蛋白质表达速度
    • 将目标蛋白与亲水性蛋白融合表达
  • 优势
    • 富集目标蛋白
    • 抗蛋白酶
    • 对宿主毒性小
  • 分离纯化和溶解
    • 洗涤
      • 用EDTA、表面活性剂和变性剂溶解部分膜蛋白和脂类杂质
    • 溶解
      • 影响因素:时间、篇H、离子强度、变性剂种类和浓度
      • 变性剂（尿素）、表面活性剂（SDS）、EDTA
    • 复性
• 蛋白质复性的方法
  • 稀释复性
    • 最常用
    • 降低变性剂浓度创造适宜的氧化还原环境，有利于蛋白质复性
    • 直接稀释
    • 流加稀释
  • 透析、超滤复性
  • 分子伴侣指导复性
    • 促进蛋白质正确折叠，抑制蛋白质伸展肽链错误折叠和聚集
  • 色谱法复性
    • 利用色谱柱辅助蛋白质复性
    • 凝胶过滤色谱
      • 变性蛋白和聚集体分子体积大的先洗脱下来
    • 变性蛋白质吸附色谱
      • 通过与变性蛋白结合将蛋白质固定在介质表面，隔离蛋白质抑制分子间相互作用
    • 亲和色谱
      • 与蛋白质特定区域结合，选择性吸附蛋白，有利于蛋白质折叠
    • 固定化辅助因子色谱
      • 将辅助因子固定在凝胶介质表面
  • 反胶团复性
    • 利用反胶团溶解变性蛋白，将蛋白质分隔开，阻止分子间相互作用
  • 双水相复性