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色谱技术：按溶质分子与固定相相互作用机理：亲和色谱（是利用生物体内存在的特异性相互作用的分子对而设计的层析方法、吸附色谱（范德华离子交换力，氢键，静电力，共价力）。

色谱技术

• 概述
  • 色谱技术
    • 定义：色谱技术是一组相关分离方法的总称,色谱柱的一般结构含有固定相（多孔介质）和流动相，根据物质在两相间的分配行为不同（由于亲和力差异),经过多次分配（吸附-解吸-吸附-解吸...)，达到分离的目的。
  • 色谱分离
    • 固定相
      • 通常为表面积很大的或多孔性固体
    • 当流动相流过固定相时，由于物质在两相间的分配情况不同，经过多次差别分配而达到分离
  • 色谱系统
    • 泵
    • 混合器
    • 层析柱
    • 检测器
    • 记录仪
    • 分部收集器
    • 概要
  • 发展过程
    • 色谱法的发展过程
    • 层析法的发展过程
• 分类
  • 按机理
    • 凝胶色谱
    • 离子交换色谱
    • 吸附色谱
    • 分配色谱
    • 亲和色谱
  • 按溶质分子与固定相相互作用机理
    • 凝胶色谱（分子大小与形状）
    • 离子交换（离子交换亲和力）
    • 吸附色谱（范德华离子交换力，氢键，静电力，共价力）
    • 分配色谱（溶质在两液相间分配系数不同）
    • 亲和色谱（是利用生物体内存在的特异性相互作用的分子对而设计的层析方法
  • 固定相形状分类
    • 柱层析
    • 纸层析
    • 薄层层析
  • 按流动相分类
    • 气相层析
    • 液相层析
    • 超临界流体层析
  • 按操作方式分类
    • 迎头法（frontal analysis)
    • 顶替法 （displacement analysis)
    • 洗脱分析（elution analysis
• 凝胶色谱
  • 原理：在样品通过一定孔径的凝胶固定相时，由于流经体积的不同，使不同相对分子量的组分得以分离。
    • 子主题
  • 凝胶色谱填料
    • 葡聚糖凝胶（化学性质稳定，若长时间不用需加防腐剂)Sephadex G-系列
    • 聚丙烯酰胺凝胶（稳定性最好，缺点:遇酸水解)Sephacryl系列
    • 琼脂糖凝胶（天然凝胶，来源丰富;稳定性不如葡聚糖， 溶胀状态保存，强度很低)Sepharose系列、superose系列
    • 其它
      • 疏水性凝胶
        • 聚甲基丙烯酸酯
        • 苯乙烯二乙烯苯
      • 多孔玻璃珠
      • 复合载体
  • 按其流动相不同
    • 凝胶过滤色谱：水相系统，凝胶为亲水性，适于分离亲水性物质
    • 凝胶渗透色谱：有机相系统，凝胶为疏水性，适于分离油溶性物质
  • 技术应用
    • 1、脱盐和浓缩（如蛋白质脱盐）
      • 子主题
    • 2、相对分子质量的测定
    • 3、在生化制药中应用
      • 去热原
      • 分离纯化
        • a. 分离分子量M差别大的混合组分
        • b. 纯化青霉素等生物药物（除去聚合分子或降解产物与蛋白相结合的 致敏物质）
        • c. 蛋白质降解产物分级分离（用0.01 M氨水跑柱、洗脱收集降解产物）
        • d. 去除注射用胰岛素中的其他大分子抗原物
• 吸附色谱
  • 原理：利用溶质与吸附剂之间的分子吸附力(范德华力，包括色散力、诱导力、定向力以及氢键)的差异而实现分离
    • 子主题
  • 关键要素
    • 吸附剂
      • 氧化铝
      • 硅胶
      • 活性炭
      • 纤维素
      • 聚酰胺
      • 硅藻土
      • 均含有氧原子或氮原子以及能够形成氢键的基团，如-OH
    • 展开剂
      • 展开剂极性越大，对同一化合物的洗脱能力越大因此，可以根据实验结果调整展开剂的极性以获得最佳的分离效果
      • 展开剂选择原则:
        • (1）对被分离组分应具有一定的解吸附能力，极性应比被分离物质的极性略小
        • (2)展开剂应对被分离物质具有一定的溶解能力
    • 操作程序
      • （1）根据要分离组分的性质（包括极性、分子量、分子结构）选择合适的固定相和流动相 （2）吸附操作:选择合适的操作条件（温度、pH值、流速)，进行装柱、平衡、上样，测定穿透样品含量以调整操作参数 （3）洗脱:采用有机溶剂洗涤、调节pH值以及体系离子强度，最大限度地回收目标产物
• 分配色谱
  • 原理:利用溶质在固定相和流动相之间的分配系数不同而分离的方法
  • 分配色谱适用范围:
    • ①所分离的化合物的极性基团相同或类似，但非极性部分（化合物的母核怪基部分）的大小及构型不同;②或者所分离的各种化合物溶解度相差较大;③或者所分离化合物的极性太强不适合于吸附色谱分离时，可以考虑采用分配色谱法。
  • 要素
    • 载体:通常为惰性材料，能吸附固定相液体。如硅胶、硅藻土、纤维素、葡聚糖凝胶
    • 固定相:通常选取对各组分溶解度大的溶剂作为固定相
    • 流动相：可以是极性的（反相色谱法），也可以是非极性的(正相色谱)