基因工程工具酶

基因工程工具酶，汇总了限制性核酸内切酶、DNA连接酶、DNA聚合酶I、Klenow大片段酶、逆转录酶、碱性磷酸酯酶、末端转移酶的特点及应用。

基因工程工具酶

• 限制性核酸内切酶
  • 种类
    • I型限制性内切酶、II型限制性内切酶、III型限制性内切酶
  • II型限制性内切酶特点
    • 每一种酶都有各自特异的识别序列
    • 限制性核酸内切酶识别序列有180度旋转对称的回文序列
    • II型限制性核酸内切酶一般都在识别序列内或两侧特异位点切割
  • 应用
    • 识别并附着特定的核苷酸序列，并对每条链中特定部位的两个脱氧核苷酸之间的磷酸二酯键进行切割
• DNA连接酶
  • 种类
    • 大肠杆菌DNA连接酶、T4噬菌体DNA连接酶
  • 特点
    • 能催化双链DNA分子中具有邻近位置的3'-羟基和5'-磷酸基团形成磷酸二酯键
  • T4DNA连接酶应用
    • 修复双链DNA上的单链切口，使两个相邻的核苷酸重新连接起来
    • 连接RNA-DNA杂交双链上的DNA切口 或杂交双链的RNA切口
    • 连接完全断开的两个平头末端双链DNA分子
• DNA聚合酶I
  • 特点
    • 5'-3'聚合酶活性
    • 5'-3'DNA外切酶活性
    • 3'-5'DNA外切酶活性
  • 应用
    • DNA杂交探针的制备
• Klenow大片段酶
  • 特点
    • 5'-3'聚合酶活性
    • 3'-5'外切酶活性
  • 应用
    • 3'末端补平
    • DNA3'末端标记
    • cDNA第二链的合成
• 逆转录酶
  • 特点
    • 依赖于RNA的DNA聚合酶
  • 应用
    • 合成cDNA
    • 合成DNA探针
• 碱性磷酸酯酶
  • 种类
    • 细菌性碱性磷酸酶、小牛肠碱性磷酸酶
  • 特点
    • 催化脱掉DNA(RNA)5'端的磷酸根
  • 应用
    • 防止线性化的载体分子自连
    • 获得5'末端磷酸基团标记的探针
• 末端转移酶
  • 特点
    • 5'-3'DNA聚合酶活性
  • 应用
    • 同聚物加尾
    • 再生酶切位点
    • DNA3'-OH末端标记