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蛋白质的结构与功能
蛋白质的分子组成
元素
C,H,O,N,S
样品中蛋白质含量=样品中含氮量×6.25
氨基酸结构与分类
一般结构
L-α-氨基酸
20种
分类
非极性脂肪族氨基酸
甘,丙,缬,亮,异亮,脯,甲硫
极性中性氨基酸
丝,苏,半胱,天冬酰胺,谷氨酰胺
芳香族氨基酸
苯丙,酪,色
碱性氨基酸
精,赖,组
酸性氨基酸
谷,天冬
氨基酸的理化性质
两性解离
兼性离子
等电点
紫外吸收
色氨酸,酪氨酸
280nm
茚三酮反应
蓝紫色化合物
深浅与量成正比
570nm
肽键和肽链
氨基酸通过肽键连接形成肽
肽键(-CO-NH-)
N→C
生物活性肽
谷胱甘肽
蛋白质的分类
化学组成
单纯蛋白质
结合蛋白质
非蛋白质:辅基
形状
纤维状蛋白质(结构蛋白)
球状蛋白质)(功能蛋白)
蛋白质的分子结构
一级结构
氨基酸排列顺序
肽键,二硫键
肽单元
肽链骨架:N,Cα,Co
二级结构
局部骨架原子
氢键
结构
α螺旋
3.6个
螺距:0.54nm
β折叠
锯齿状,交错
平行排列,氢键
顺反平行折叠
β转角
Ω环
无规卷曲
模体(超二级结构)
特定功能区
三级结构
空间排布
疏水键,盐键,氢键,范德华力
次级键,副键,二硫键
结构域
局部结构,独立构象和功能
子主题
蛋白质的理化性质
蛋白质的分离纯化
蛋白质的生物学功能
收缩或运动蛋白质
肌动蛋白
酶
催化
调节蛋白
激素
受体
转录因子
转运蛋白
血红蛋白
载脂蛋白
防御蛋白
免疫球蛋白
营养和存储蛋白
酪蛋白
卵清蛋白
铁蛋白
结构蛋白
胶原蛋白
角蛋白
蛋白质结构与功能的关系
四级结构
亚基
氢键,盐键
pH<等电点,蛋白质带+
pH=等电点,蛋白质不带电
pH>等电点,蛋白质带-
胶体性质
原因
水化膜
电荷
等电点沉淀法
变性
本质
空间构象被破坏
一级结构不变
因素
物理:高温,高压 ,X线照射,超声波,剧烈震荡与搅拌
化学:强酸,强碱,重金属盐,有机溶剂,浓尿素生物碱和十二烷基硫酸钠
意义
低温保存生物活性蛋白质
利用变性因素进行消毒灭菌
呈色反应
双缩脲
紫红色
检测蛋白质的降解程度
透析与超滤
透析
半透膜
超滤
沉淀
盐析
方法
用高浓度的中性盐将蛋白质从溶液中析出
原理
水化膜被剥离
表面电荷被中和
基本不使蛋白质变性
有机溶剂沉淀
丙酮沉淀
重金属盐、生物碱试剂及某些酸沉淀
免疫沉淀
电泳
带电粒子定向移动
SDS-聚丙烯酰凝胶电泳
等电聚焦电泳
色谱
离子交换色谱
蛋白质两性解离特性
固定相
离子交换剂
凝胶过滤
利用各蛋白质分子大小不同分离
多孔凝胶颗粒
流动相
不意导致蛋白质等生物分子变性的基本缓冲溶液
超速离心
氧化供能
蛋白质一级结构与功能的关系
蛋白质的一级结构是空间构象的基础
一级结构相似的蛋白质具有相似的高级结构与功能
蛋白质分子中重要的氨基酸改变可引起疾病
蛋白质空间构象与功能的关系
蛋白质功能依赖于特定的空间结构
血红蛋白亚基与肌红蛋白结构相似
血红蛋白亚基构象变化可影响与氧结合