① 在454测序仪中,ATCG分别存储在单独的试剂瓶中,每步反应四种碱基依次加入反应池
② 碱基配对结合
③ 释放出一个焦磷酸ppi
④ 焦磷酸在ATP硫酸化酶的作用下,将荧光素氧化成氧化荧光素
⑤ 发出光信号,从而读取这一位置的碱基信息。
illuminate Hiseq2000
桥接扩增测序或合成测序
① 每一个dNTP用不同荧光标记,末端带有可以被去除的阻断基团
② 每轮测序反应加入四种带有荧光标记的dNTP
③ 每轮反应只整合一个核苷酸,仪器读取相应荧光信号
④ 信号读取结束,化学方法去除阻断基团 → 进行下一步测序反应
根据每轮反应读取的荧光信号序列,转换为相应的DNA序列
ABI Solid
通过连接进行测序
① 探针5'末端标记1种颜色的荧光染料
② 探针第1、2位构成的碱基对应探针染料类型,3-5位"n"是随机碱基 6-8位"z"是可以与任何碱基配对的特殊碱基
③SoliD测序反应的每一轮测序反应会连接第1-5位的碱基,同时切除第6-8位的碱基,同时记录第1-2位碱基决定的荧光颜色
注:两个碱基共同决定一个颜色,提高测序准确率