细胞生物学技术部分大纲

上交医细胞生物学技术大纲，前面部分，不包括综合内容。

细胞生物学技术

• 1.离心技术
  • 概念
  • 离心方法
    • 差速离心法
      • 概念
      • 特点
    • 移动区带密度离心法/速度沉降
      • 概念
      • 特点及用途
    • 等密度梯度离心法/沉降平衡离心
      • 概念
      • 特点及用途
  • 离心分离三要素
    • 沉降系数S
    • 离心时间t
    • 相对离心力RCF
  • 决定离心行为的两个主要因素
    • 溶液和设备（离心机、离心介质）
    • 颗粒的属性（大小、密度等）
  • 细胞结构成分的分离
    • 细胞沉淀
    • 细胞破碎
    • 离心
      • 离心方法的选择
    • 分离细胞器的鉴定和评价
• 2.细胞培养技术
  • 细胞增殖
    • 概念
    • 特征
  • 细胞培养
    • 细胞培养概念
    • 细胞培养特征、生存条件
    • 细胞培养类型
      • 贴附型
      • 悬浮型
    • 一代 概念
      • 潜伏期
      • 指数增长期
      • 平台期
  • 培养细胞的生命期
    • 原代培养期
    • 传代期
      • 传代概念
    • 衰退期
  • 细胞冻存
  • 细胞复苏
  • 慢冻速融
  • 细胞活力检测
• 3.细胞工程
  • 核酸导入方法
    • 化学方法
    • 生物学方法
    • 物理方法
  • 脂质体
• 4.电镜技术
  • 电子显微镜原理
  • 电子束、分辨率概念
  • TEM、透射电子
    • 概念
    • 成像和工作原理
    • 样本制备
      • 超薄切片技术
        • 取材
          • 快
          • 小
          • 轻
          • 冷
        • 预固定
          • 组织块浸泡固定（2.5%戊二醛（PB配置））
          • 血液灌注固定
        • 后固定（1%锇酸）
        • 脱水
        • 浸透、包埋聚合
        • 修块、切片
          • 半薄切片（意义）
          • 超薄切片
        • 染色
      • 负染色技术
      • 免疫电镜技术
    • 细胞自噬 概念
  • SEM、二次电子 概念
  • TEM、SEM的比较
    • 成像信号
    • 样品制备
    • 图像特点
    • 应用
• 5.光学显微镜
  • 荧光
    • 荧光素 概念
    • 标本中荧光来源
      • 自发荧光、荧光染料、荧光标记抗体、外源导入的荧光蛋白
    • 荧光蛋白标记优点
      • 动态监测
      • 活体检测
      • 长时间检测
      • 容易融合
    • 荧光显微镜
  • 激光扫描共聚焦显微镜 LSCM
    • 概念
    • 成像原理
      • 激光
      • 共聚焦+扫描
      • 图像的探测和数字信号转换
    • 优缺点
    • 功能
    • 医学和生物学应用
  • 超高分辨率显微镜
    • 原理
      • 基于点扩展函数的调制
        • 点扩展函数 概念
      • 基于随机单分子定位
• 6.流式细胞术
  • 概念
  • 流式细胞仪
  • 光信号类型
    • 散射光信号（细胞固有参数）
      • 前向散射光/小角度散射光/FSC
      • 侧向散射光/90度散射光/SSC
      • 散射光作用
    • 荧光信号
      • 自发荧光（细胞色素因子、核黄素）
      • 特异荧光
        • 核酸荧光染料
          • PI
          • 7-AAD
          • DAPI
          • Hoechst
          • PY
          • AO
  • 电信号放大方式
    • 线性——FSC、SSC
    • 对数——荧光信号
  • FCM数据存储、显示与分析
    • 存储——列表模式
    • 显示
      • 单参数直方图
      • 双参数图——散点图、等高线图
      • 三参数图
    • 分析——“设门”分析
  • 流程
    • 单细胞悬液制备
      • 新鲜实体组织的样本制备
        • 最终要求
        • 酶消化法
        • 机械法
        • 化学处理法
      • 石蜡包埋组织的样本制备
      • 血液、骨髓的样本制备
        • Ficoll密度梯度离心法——不适合粒细胞
        • 红细胞裂解法——低渗NH4Cl溶液
      • 培养细胞单细胞悬液制备
      • 体液脱落细胞的样本制备
    • 荧光标记
      • 表面、胞浆、核内
    • 对照设置
      • 空白对照
      • 阳性对照
      • 单表对照
    • 光谱重叠与补偿
  • 应用
    • 检测细胞周期
      • PI标记法
    • 检测细胞凋亡
      • 亚二倍体（Sub-G1）峰的检测
      • Annexin V/PI双染法
    • 免疫细胞亚型检测
    • 检测细胞因子
    • 流式分选
      • 免疫细胞亚群分选
      • 子主题
      • GFP阳性稳转株分选
      • 干细胞研究分选
• 7.细胞化学技术
  • 应用
  • 特点
    • 原位
      • 组织细胞固定
      • 活细胞
    • 细胞化学反应及可见性
      • 酶细胞化学技术
      • 免疫细胞化学技术
        • 直接法——直接标记第一抗体；间接法——标记第二抗体或复合物
        • 分类——根据 标记物
          • 免疫荧光技术
          • 免疫酶技术
          • 免疫胶体金技术
      • 放射自显影
      • 原位杂交技术
        • 原理
        • 相关概念：变形、复性、探针
        • 靶核酸：DNA、RNA
        • 探针标记物：放射性、非放射性
        • 原位杂交反应：杂交液、探针浓度、温度、PH、时间
        • 杂交条件的严格度
          • 严格度概念
          • 高严格度条件和一般原则
        • 杂交体的探测：免疫细胞化学、放射自显影
    • 细胞化学反应的观察（光镜、电镜、共聚焦）
  • 蛋白质定量：免疫印迹（Western blot）
  • 核酸定量
    • PCR
    • PT-PCR（逆转录PCR）——检测mRNA的量
    • qPCR（real-time PCR）——定量检测DNA
      • 定量方法
      • 结果判定