生物素-亲和素系统

临床免疫检验的生物素-亲和素系统，来自广州医科大学检验系

生物素-亲和素系统

• 学习目标： 【掌握】 1、掌握生物素、亲和素的基本概念。 2、生物素-亲和素标记技术的基本类型和原理。 【熟悉】 1、生物素标记物、亲和素标记物的制备。 2、生物素-亲和素放大系统的特点及应用。 【了解】生物素-亲和素标记技术的应用和发展。
• 基本概念
  • 生物素（B）：维生素H
    • 特点
      • 只有活化才能偶联生物大分子
      • 多价性——放大效应（一个蛋白质分子+多个生物标记物）
      • 抗原抗体标记后活性不变
      • 能影响酶活性
    • Ⅰ环咪唑酮——亲和素结合部位
    • Ⅱ环噻吩环戊酸侧链——连接生物大分子
  • 亲和素（A）：碱性糖蛋白
    • 活性单位：1ug亲和素结合生物素的量
  • 链霉亲和素（SA）：与亲和素类似的蛋白质
  • 区别
• 制备
  • 生物素标记物
    • 活化生物素+大分子生物（抗原抗体）
    • 活化生物素+酶/荧光素/胶体金
    • 生物素标记抗体IgG
  • 亲和素标记物
    • 直接标记法（A+E）：过碘酸钠法、戊二醛法
    • 间接标记法（A+B+E)
• 检测信号放大 ——BAS-酶免疫技术
  • LAB标记亲和素-生物素法：先【生物素标记物】后【酶标亲和素】
  • BAB桥连亲和素-生物素法：先【生物素标记物】后【亲和素】（结合生物素）再【酶标生物素】（与亲和素结合）
  • ABC亲和素-生物素化酶复合法：先【生物素标记物】后【酶标亲和素-生物素】
  • PAP-ABC酶-抗酶-亲和素-生物素化酶复合法
• 固相包被
  • 生物素标记蛋白一链霉亲和素一生物素化抗体/抗原包被法
  • 链亲和素一生物素化抗体/抗原包被法