平面色谱法的思维导图

这是一篇关于平面色谱法的思维导图，定义:在平面上进行分离的一种色谱方法，主要包括薄层色谱法和纸色谱法。

平面色谱法

• 定义：在平面上进行分离的一种色谱方法，主要包括薄层色谱法和纸色谱法。
• 参数
  • 定性参数
    • 比移值（Rf）：溶质移动距离与流动相移动距离之比。
      • 如图： RfA= a / c RfB= b / c a 、 b 为原点至斑点中心的距离， c为原点至溶剂前沿的距离
      • 影响比移值的因素
        • 被分离物质的结构和性质
        • 平面的性质
        • 展开剂的性质
        • 温度
        • 展开剂蒸气饱和程度
      • 最佳范围：0.3-0.5 可用范围：0.2-0.8
    • 相对比移值（ R )：原点到组分斑点质量中心的距离与原点到参考物斑点质量中心的距离之比
      • 与组分、色谱条件、参考物质有关。
      • R 值可以大于1，也可以小于1。
      • 重现性和可比性均比 R 值好，能消除系统误差 （参考物质与组分在完全相同的条件下展开）
  • 相平衡参数
    • 分配系数 K = Cs / Cm
    • 容量因子 k
    • K 、 k 与 R 值的关系
    • R 为1的组分， K 与 k 为0，表示该组分不被固定相保留； R 为0的组分， K 与 k 为∞，表示该组分停留在原点，完全被固定相所保留。
    • 分离度（ R ):两相邻斑点中心距离与两斑点平均宽度（纵向直径）的
• 分类
  • 薄层色谱法
    • 定义：把固定相均匀地铺在玻璃板、铝箔或塑料板上形成薄层，在此薄层上进行色谱分离
    • 原理:固定相（吸附剂或载体）涂布成一均匀薄层，点样，（密闭的容器中）展开，斑点显色，（与对照物质）比较进行定性定量。
    • 特点
      • 快，需十至几十分钟，同时展开多个试样。试样预处理简单，对试样限制少。
      • 载样量比较大，适用于制备。
      • 仪器简单，操作方便。
      • 分离能力较强。
      • 灵敏度较高。
    • 操作方法
      • 制板（均匀）
      • 点样（集中）
        • 点样体积：一般在1~10ul，点样量太大，斑点易拖尾
        • 点样方式：接触式点样与喷雾式点样
        • 原点形状：点状、条状
        • 点样器具：微量进样器、定量毛细管；
        • 底距：1.5~2cm
        • 点距：0.8~1.5cm
        • 原点直径：2~3 mm 。（边点边热风吹）
      • 展开（多种方式）
      • 显色
        • 有色化合物：直接定位
        • 无色化合物
          • 有紫外吸收 （物理定位）
            • 不仅有紫外吸收且能产生荧光
              • 斑点有荧光
            • 只有紫外吸收不能产生荧光
              • 荧光板上有暗斑
          • 无紫外吸收 （显色剂定位）
            • 喷雾或浸渍显色
            • 蒸气显色：碘﹣生物碱、氨基酸衍生物、肽类、脂类及皂苷
            • 喷雾或浸渍后加热显色
          • 显色剂：通用有碘、硫酸
    • 边缘效应
    • 吸附薄层色谱法
      • 原理：组分在薄层板上吸附、解吸附、再吸附、再解吸附的过程。
      • 吸附系数不等实现分离。
      • 一般极性强的组分 K 大， R 值小；极性弱的组分 K 小， R 值大。
      • 吸附剂
        • 硅胶：多孔性微粒，表面带有硅醇基，呈弱酸性。
          • 原理：硅醇基（吸附中心）与极性基团形成氢键（吸附性）。 组分与硅醇基形成氢键（被吸附）的能力不同而分
          • 应用：酸性和中性物质的分离，如有机酸酚类、醛类等。
          • 含水量高，活性级高，活度低。
          • 活化：加热至100℃左右，除去吸附水提高活度。（注意温度不可过高）
          • 分离效率：与其粒度、孔径及表面积等有关。
          • 常用硅胶
            • 硅胶 H ，不含黏合剂
            • 硅胶 G，含煅石膏
            • 硅胶GF25，含煅石膏和一种无机荧光剂，即锰激活的硅 酸锌，在254nm紫外光下呈强烈黄绿色荧光背景。
        • 氧化铝
          • 碱性氧化铝（pH9.0)：分离中性或碱性化合物，如生物碱
          • 中性氧化铝（pH7.5)-﹣分离酸性及对碱不稳定的化合物
          • 酸性氧化铝（pH4.0)-﹣酸性化合物的分离。
        • 聚酰胺
          • 聚酰胺可分离极性和非极性物质
      • 展开剂（流动相）
        • 同吸附柱色谱，极性强的溶剂洗脱能力强
        • 常用溶剂的极性强弱顺序： 水＞酸＞吡啶＞甲醇＞乙醇＞正丙醇＞丙酮＞乙酸乙酯＞乙醚＞氯仿＞二氯甲烷＞甲苯＞苯＞三氯乙烷＞四氯化碳＞环己烷＞石油醚
    • 分配薄层色谱法
      • 原理：多次分配的过程，分配系数（溶解）不等实现分离
      • 正相色谱：水为固定相（硅胶载体），有机溶剂为流动相。 极性强的组分 K 大， R 值小。
      • 反相色谱：烷基化学键合相为固定相，水一有机溶剂为流动相。 极性强的组分 K 小， R 值大。
    • 分子排阻薄层色谱法
  • 纸色谱法：分配
    • 定义：以纸作为载体的色谱法。
    • 原理
      • 纸纤维为载体，吸着在其上的水为固定相
      • 属于正相分配色谱
      • 依据分配系数的不同而达到分离
      • 极性或亲水性强的组分， K 大， R 值小， 极性弱或亲脂性强的组分， K 小， R 值大。
    • 色谱纸的选择
      • 对Rf值相差很小的化合物，宜采用慢速滤纸 对Rf值相差较大的化合物，则可用快速滤纸
      • 固定相：水或甲酰胺、二甲基甲酰胺、丙二醇或缓冲溶液
  • 薄层电泳法
    • 定义：电泳法是指带电荷的分离物质（蛋白质、核苷酸、多肽、糖类等）在纸、醋酸纤维素、琼脂糖凝胶及聚丙烯酰胺凝胶等支持介质上，向与其相反的电极方向以不同速度泳动（或迁移）而实现分离，然后对组分进行定性和定量的方法。聚丙烯胺凝胶平板电泳等属平面色谱。