病毒感染的检查方法与防治原则

医学微生物学病毒感染的检查方法与防治原则，介绍详细，知识全面，希望可以对大家有所帮助！

病毒感染的检查方法与防治原则

• 检查方法
  • 标本采集
  • 分离培养鉴定
    • 分离培养
      • 动物接种——最早的病毒分离方法
      • 鸡胚培养——对流感病毒最为敏感
        • 优点：易管理，不带微生物，成本较低
        • 缺点： 操作程序复杂
      • 细胞培养（最常用）
        • 原代和次代细胞培养
        • 传代细胞培养
    • 鉴定
      • 增殖的鉴定指标
        • 细胞病变CPE
          • 溶细胞型病毒：可致细胞出现致细胞病变作用
          • 体外试验中，通过细胞培养和接种杀细胞性病毒，经过一段时间，用显微镜观察到细胞变圆、坏死、从瓶壁脱落等现象
        • 红细胞吸附hemadsorption
          • 病毒表面血凝素（HA）+红细胞表面HA受体 包膜上带有血凝素的病毒感染敏感细胞后，血凝素会出现于细胞膜表面，使感染细胞能与加入的红细胞结合
        • 病毒干扰作用
          • 某些病毒感染细胞后不出现CPE，但可干扰其后感染同一细胞的另一种病毒的增殖，从而阻抑后者所特有的CPE。
        • 细胞代谢的改变
          • 培养环境的生化改变：培养液的pH值变化
      • 感染性测定及病毒数量测定
        • 红细胞凝集试验
          • 含有血凝素的病毒接种鸡胚或感染细胞后，如病毒增殖并释放至细胞外，收集鸡胚羊膜腔液、尿囊液，或收集细胞培养液，加入动物红细胞后可出现红细胞凝集，可作为病毒增殖的指标。
          • 血凝反应的最高稀释度：血凝效价
          • 定量测定病毒数量，但不限于感染性的病毒
        • 中和试验
          • 病毒＋特异性中和抗体→病毒失去感染性
          • 特点：特异性高，抗体维持时间长
          • 应用：人群免疫情况的调查、临床诊断较少用
          • 用已知抗某病毒血清先与待测病毒悬液混合，在适温下作用一定时间后接种敏感细胞，经培养后观察CPE或红细胞吸附现象是否消失
        • 空斑形成试验
          • 将一定量适当稀释浓度的待检病毒液接种于敏感的单层细胞中，经一定时间培养后，在细胞上方覆盖一层融化尚未凝固的琼脂后继续培养，可见单个病毒的增殖使感染的单层细胞溶解脱落，形成肉眼可见的空斑，一个空斑是由一个病毒增殖所致，计数培养皿中空斑数可推算出该样品中病毒的数量。
          • 可准确定量具有感染性的病毒粒子数量
        • 50%组织细胞感染量（TCID50）
          • 病毒感染引起50%细胞发生病变的最高稀释度
          • 将待测病毒液作10倍系列稀释，分别接种单层细胞，经培养后观察CPE等指标，以能感染50%细胞的最高稀释度的病毒量为终点，经统计学处理计算TCID50。该法以CPE来判断病毒的感染性和毒力。
        • 感染复数
          • 原指在一特异性试验中感染单一细菌细胞的噬菌体的平均数，现作为病毒感染性的定量检测。
  • 快速诊断
    • 形态学鉴定
      • 电镜和免疫电镜检查
      • 光学显微镜检查
        • 包涵体
    • 病毒蛋白抗原检测
      • 酶免疫Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA)
      • 荧光免疫Fluoroimmunoassay (FIA)
      • Radioimmunoassay (RIA)
      • 蛋白印迹Western blot assay (WB)
      • 免疫电镜（IEM）
    • 病毒核酸检测
      • 核酸电泳
      • 核酸杂交
        • 斑点杂交
        • 原位杂交
        • DNA印迹和RNA印迹
      • 聚合酶链反应PCR
      • 基因芯片技术
      • 基因测序NGS
    • 血清学检测：病毒特异性抗体检测
      • 利用已知抗体鉴定种、型和亚型
      • 血凝抑制试验（hemagglutination inhibition test）——正粘病毒型与亚型鉴定
        • 病毒+血清中特异性抗体+红细胞
        • 病毒失去凝集红细胞的能力
      • 早期抗体检测——辅助诊断急性病毒感染
        • 检测病毒特异性IgM：如诊断孕妇感染风疹病毒
        • 检测早期抗原的抗体：如EBV急慢性感染的诊断
      • 免疫印迹试验
      • 凝胶免疫扩散试验（gel immuno-diffusion test）
    • Detection of host response (clinics)
      • 临床症状、病史和流行病学
      • Hemogram (血象) change
        • •病毒感染:白细胞较少，淋巴细胞较多
        • •细菌感染:白细胞较多，尤其是中性粒细胞较多
      • 生化分析
        • C反应蛋白（CRP）和降钙素原（PCT）升高提示细菌感染；病毒感染时无升高
• 防治原则
  • 特异性预防
    • 人工主动免疫
      • 疫苗
      • 减毒活疫苗：流行性腮腺炎、麻疹、风疹和脊髓灰质炎
      • 灭活疫苗：乙脑、甲肝、肾综合征出血热、狂犬病、脊髓灰质炎和流感
      • 亚单位疫苗：病毒包膜蛋白或衣壳的生化提取，如狂犬病毒
      • 基因工程疫苗：由基因工程产生的保护性病毒蛋白，如rHBsAg
      • 重组载体疫苗：用疫苗株或非致病性病毒表达病毒抗原，如牛痘株、Adeno5
      • 核酸疫苗
    • 人工被动免疫
      • 免疫球蛋白（抗血清、血浆和抗体）
        • 人正常免疫球蛋白:对甲型肝炎、麻疹有一定疗效
        • 特异性免疫球蛋白:如狂犬病、乙肝病毒
      • 细胞因子免疫制剂：IFN、IL、TNF
  • 治疗
    • 困难： 没有高度特异性根治性药物 对潜伏感染无效 突变率高，易产生耐药性
    • 抗病毒的化学药物
      • 核苷类化合物
        • 机制:抑制DNA合成
        • 5-碘2-脱氧尿嘧啶核苷
        • 阿昔洛韦ACV
        • 阿糖腺苷
        • 利巴韦林
          • RNA病毒感染：流感病毒，呼吸道合胞病毒
        • 齐多夫定AZT
        • 拉米夫定
      • 非核苷类化合物
        • 逆转录抑制剂
        • HIV
      • 蛋白酶抑制剂
        • HIV
      • 金刚烷胺类
        • 甲型流感病毒
      • 帕罗韦德(Paxlovid): 奈玛特韦(Nirmatrelvir)+利托那韦(Ritonavir) 靶点：SARS-CoV-2的3CL蛋白酶 (Mpro) 剂
    • 中草药：黄芪皂苷、板蓝根
    • 干扰素及其诱生剂：治疗HBV和HCV
    • 基因治疗剂
      • 反义寡核苷酸（asON）
      • 干扰 RNA（siRNA）
      • 核酶
    • 治疗性疫苗
    • 新抗生素类