导图社区 细胞生物学——第二章：研究方法
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细胞生物学——第二章：研究方法
1.细胞形态结构的观察方法
光学显微镜
分辨率为0.2微米
可以直接用于观察单细胞生物或体外培养的细胞
相差显微镜
比普通光学显微镜高一个数量级
用于观察活细胞显微结构
微分干涉显微镜
可连接高分辨率录像装置
用于观察活细胞
荧光显微镜
较普通光学显微镜有所改善
观察特定蛋白等大分子，观察细胞动态变化
激光扫描共焦显微镜（LSCM）
比普通荧光显微镜的分辨率提高1.4到1.7倍
研究亚细胞结构与组分的定位及动态变化
电子显微镜
电子显微镜分辨率可达0.2nm，其放大倍数为10(6)倍
主要电镜制样技术
超薄切片技术
步骤
固定、脱水、包埋、聚合、修块、切片、染色
应用
观察细胞超微结构
负染色技术
显示纯化后的细胞组分或精细结构
冷冻蚀刻技术
样品制备过程
冷冻断裂与蚀刻复型
观察膜断裂面上的蛋白质颗粒和膜表面形貌特征
观察胞质中的细胞骨架纤维及其结合蛋白
电竞三维重构与低温电镜技术
电镜三维重构技术
低温电镜技术
电子断层成像技术
扫描电镜（SEM）技术
样品处理
二氧化碳临界点干燥法
观察核孔复合体等更精细的结构，但不能观察活的生物样品
二者的区别
照明源不同
光镜——可见光（波长400—760nm）
电镜——电子束（波长0.01—0.9nm）
分辨本领不同
光镜——200nm
电镜——0.2nm
透镜不同
光镜——玻璃透镜
电镜——电磁透镜
成像原理不同
光镜——利用样本对光的吸收形成明暗反差和颜色变化
电镜——利用样品对电子的散射和透射形成明暗反差
所用标本制备方式不同
扫描隧道显微镜（STM）
STM是一种探测微观世界物质表面形貌的仪器。在纳米生物学的研究领域，具有独特的优越性。
特点
1.具有原子尺度的高分辨本领。
2.可直接观察到DNA、RNA和蛋白质等生物大分子及生物膜、病毒等结构
3.可在真空，大气，液体等条件下工作。
4.非破坏性测量
2.细胞及其组分的分析方法
超离心技术
差速离心
逐渐提高离心速度
密度梯度离心
沉降率
与各组分的形状和大小有关，通常以沉降系数（S值）表示
常用的介质
蔗糖和氯化铯等
分类
速度沉降
等密度沉降
特异蛋白抗原的定位与定性技术
免疫荧光技术
定义
免疫学与荧光技术结合，用于研究特异蛋白抗原在细胞内的分布
直接免疫荧光技术
荧光分子与抗体偶联后，直接用于免疫标记技术
间接免疫荧光技术
先将抗体与抗原反应，后加入与荧光分子相偶联的抗第一抗体的抗体
荧光抗体的制备，标本的处理，免疫染色，观察记录
免疫电镜技术
将抗体进行特异性免疫反应标记后，再在电子显微镜下观察免疫反应结果的技术，解决了分辨率不足的问题
免疫铁蛋白技术
免疫酶标技术
免疫胶体金技术
样品的固定，样品的包埋，超薄切片制备，免疫标记，染色，观察
原位杂交
细胞内特异核酸的定位与定性
流式细胞术
细胞成分的分析与细胞分选技术
3.细胞培养与细胞工程
细胞培养
动物细胞培养
原代细胞和传代细胞
细胞系和细胞株
单层细胞培养
体外培养细胞的基本形态
成纤维样细胞，上皮样细胞，可移动的游走细胞
植物细胞培养
单倍体细胞培养
原生质体培养
细胞工程
单克隆抗体技术
细胞融合
方法
灭活的病毒（如仙台病毒）作为促融剂
化学物质（如聚乙二醇，PEG）作为促融剂
电融合技术方法
同核体融合
异核体融合
显微操作技术与动物的克隆
细胞拆合
显微操作技术
4.细胞及生物大分子动态变化的研究技术
细胞及生物大分子动态变化的研究技术
5.模式生物与功能基因组的研究
细胞生物学研究常用的模式生物
突变体制备技术
RNAi、基因敲除、DNA水平突变体的制备方法
蛋白质组学技术
双向凝胶电泳、色谱技术、质谱（MS）、蛋白质芯片
