细菌生化鉴定技术

这是一篇关于细菌生化鉴定技术的思维导图，主要内容包括：蛋白质和氨基酸的代谢试验。每种试验都详细描述了其原理、所需的培养基和试剂、试验方法、结果判断以及应用。

细菌生化鉴定技术

• 蛋白质和氨基酸的代谢试验
  • 靛基质试验
    • 吲哚试验
    • 原理：细菌分解底物色氨酸产生靛基质（吲哚）和丙酮酸，靛基质与对二甲基氨基苯甲醛反应生成红色化合物（玫瑰吲哚）
    • 培养基：蛋白胨水
    • 试剂：靛基质试剂（对二甲基氨基苯甲醛）
    • 方法：将待测菌种接种于培养基，35℃24--48h，（看结果前加试剂）加入靛基质试剂，观察结果
    • 结果：1.阳性--交界处出现红色2.阴性--不变色
    • 应用：肠杆菌科细菌鉴定（大肠埃希杆菌--阳性） （产气肠杆菌，沙门氏菌--阴性）
  • 硫化氢试验
    • 原理：细菌分解底物含硫氨基酸（胱氨酸，半胱氨酸）产生硫化氢，硫化氢与培养基中Fe2+(Ph2+)反应生成黑色硫化亚铁（硫化铅）
    • 培养基：醋酸铁（铅）培养基
    • 显色剂：Fe2+（黑色）
    • 方法：将待测菌接种到培养基，35℃培养1--2天，观察结果
    • 结果：1.阳性--黑色2.阴性--不变色
    • 应用：肠杆菌科属和种间的鉴定 （沙门氏菌属，枸橼酸杆菌属，变形杆菌--阳性）
  • 脲酶试验
    • 尿素分解试验
    • 原理：细菌具有脲酶，将底物尿素分解成氨（使培养基成碱性）和二氧化碳，培养基变红
    • 培养基：尿素培养基
    • 指示剂：酚红
    • 方法:将待测菌接种于培养基，35℃培养18--24h，观察结果
    • 结果：1.阳性--红色 2.阴性--黄色（不变色)
    • 应用：肠杆菌科中变形杆菌属的鉴定（雷氏普罗威登菌，摩根菌--阳性）
  • 苯丙氨酸脱氨酶试验
    • 原理：细菌可以产生苯丙氨酸脱氨酶，可使苯丙氨酸脱去氨基形成苯丙酮酸，与氯化铁反应形成绿色化合物
    • 培养基：苯丙氨酸琼脂培养基
    • 试剂：10%氯化铁
    • 方法：1.将待测菌接种培养基上，25℃培养18--24h，(看结果前加试剂）滴加3滴氯化铁试剂（自上流下，若延长时间观察会引起褪色） 2.纸片法：1立方厘米滤纸片浸入10%苯丙氨酸磷酸盐缓冲液（pH7.2--7.4）晾干，将待测菌涂布在纸片上，35℃培养15min，滴加10%氯化铁溶液，观察结果
    • 结果：1.阳性--绿色 2.阴性--黄色|无色（不变色)
    • 应用：肠杆菌科细菌鉴定（变形杆菌属，摩根菌属，普罗菲登斯菌属--阳性）其他为阴性
  • 氨基酸脱羧酶试验
    • 原理：细菌产生氨基酸脱羧酶，可分解底物氨基酸脱去羧基产生胺（使培养基呈碱性）和二氧化碳，指示剂变色
    • 培养基：氨基酸脱羧酶培养基
    • 指示剂：溴甲酚紫
    • 方法：将待测菌接种于培养基和氨基酸对照管（不含氨基酸），35℃培养1--4天，观察结果
    • 结果：1.阳性--对照管黄色，测定管紫色2.阴性--都是黄色
    • 应用：肠杆菌科细菌鉴定