《人体寄生虫学》附录四寄生虫病实验诊断技术思维导图

《人体寄生虫学》附录四寄生虫病实验诊断技术

一、病原学诊断技术

1. 粪便检查

1||| 直接涂片法

螨虫卵检查

操作步骤：生理盐水涂片，粪便涂抹，加盖玻片观察

注意事项：鉴别虫卵与粪便异物

原虫检查

滋养体检查：薄涂片，保温观察

包囊磺液染色检查：碘液染色，检查包囊与活滋养体

稳孢子虫卵囊染色检查：金胺-酚改良抗酸染色法、金胺-酚染色法、改良抗酸染色法

2||| 定量透明厚涂片法（改良加藤厚涂片法）

操作步骤：定量板取样，甘油-孔雀绿溶液透明化，镜检计数

计算公式：虫卵数×24×粪便性状系数=每克粪便虫卵数（EPC）

3||| 浓聚法

沉淀法

重力沉淀法：自然沉淀，倒去上层液，取沉渣镜检

离心沉淀法：离心后取沉渣镜检

永碘醛离心沉淀法：浓集、固定和染色

醛醛沉淀法：浓集效果好，不损伤包囊和虫卵

浮聚法

饱和盐水浮聚法：检查钩虫卵

硫酸锌离心浮聚法：检查原虫包囊、球虫卵囊等

蔗糖溶液离心浮聚法：检查隐孢子虫卵囊

4||| 毛蚴孵化法

操作步骤：粪便沉渣孵化，观察毛蚴

5||| 肛门拭子法

棉签拭子法：擦拭肛门，饱和盐水浮聚法检查

透明胶纸法：胶纸粘贴肛门，镜检

6||| 钩蚴培养法

操作步骤：滤纸培养，观察钩蚴

7||| 淘虫检查法

操作步骤：粪便过滤，检查驱除的虫体

8||| 带绦虫孕节检查法

操作步骤：孕节压平观察，子宫分支计数

2. 体液检查

1||| 血液检查

检查疟原虫

采血与涂片：薄血膜、厚血膜制作

固定与染色：吉姆萨染色法、快速吉姆萨染色法、瑞特染色法

检查丝虫微丝蚴

新鲜血片检查、厚血膜检查、活微丝蚴浓集法

2||| 脑脊液检查

检查阿米巴滋养体、弓形虫滋养体等

操作步骤：离心后取沉渣涂片镜检

3. 排泄物与分泌物的检查

1||| 痰液

检查卫氏并殖吸虫卵、溶组织内阿米巴滋养体等

操作步骤：直接涂片法、浓集法

2||| 十二指肠液和胆汁

检查蓝氏贾第鞭毛虫滋养体、华支睾吸虫卵等

操作步骤：直接涂片法、离心浓集法

3||| 尿液

检查阴道毛滴虫、丝虫微丝蚴等

操作步骤：离心后取沉渣镜检

4||| 鞘膜积液

检查班氏微丝蚴

操作步骤：直接涂片法、离心后取沉渣镜检

5||| 阴道分泌物

检查阴道毛滴虫

操作步骤：生理盐水涂片镜检

4. 其他器官组织检查

1||| 骨髓穿刺

检查杜氏利什曼原虫

操作步骤：穿刺抽取骨髓液，涂片染色镜检

2||| 淋巴结穿刺

检查利什曼原虫、丝虫成虫

操作步骤：穿刺抽取淋巴结组织液，涂片染色镜检

3||| 肌组织活检

检查旋毛虫幼虫、并殖吸虫等

操作步骤：取肌组织，涂片或切片染色镜检

4||| 皮肤及皮下组织活检

检查猪囊尾蚴、利什曼原虫等

操作步骤：取皮肤组织，涂片或切片染色镜检

5||| 结肠与直肠黏膜活检

检查日本血吸虫卵、溶组织内阿米巴等

操作步骤：钳取黏膜组织，涂片或切片染色镜检

二、免疫学诊断技术

1. 一般免疫学诊断技术

1||| 间接血凝试验

原理：红细胞作为抗原载体，特异性抗体结合后产生凝集

应用：疟疾、阿米巴病等

2||| 乳胶凝集试验

原理：乳胶微粒作为载体，特异性抗体或抗原结合后产生凝集

应用：弓形虫病、囊虫病等

3||| 间接免疫荧光抗体试验

原理：荧光素标记第二抗体，检测抗原或抗体

应用：疟疾、丝虫病等

4||| 酶联免疫吸附试验

原理：标记的抗原或抗体与固相载体结合，显色反应

应用：多种寄生虫感染的诊断

5||| 酶联免疫斑点试验

原理：抗体捕获细胞分泌的细胞因子，酶联斑点显色

应用：临床诊断和治疗参考

6||| 免疫酶染色试验

原理：酶标记的第二抗体与特异性抗体结合，显色反应

应用：血吸虫病、丝虫病等

7||| 免疫印迹试验

原理：电泳、电转印及固相酶免疫试验结合

应用：寄生虫抗原分析和免疫诊断

8||| 免疫层析技术

原理：层析技术与抗原-抗体反应结合

应用：常见寄生虫病的快速诊断

2. 寄生虫学特殊免疫学诊断技术

1||| 诊断弓形虫感染的染色试验

原理：活弓形虫滋养体与血清反应，染色观察

应用：弓形虫病的诊断

2||| 血吸虫环卵沉淀试验

原理：虫卵内抗原与特异性抗体结合，形成沉淀

应用：血吸虫病的诊断

3||| 旋毛虫环沉淀试验

原理：旋毛虫幼虫与血清反应，形成沉淀

应用：旋毛虫病的诊断

3. 单克隆抗体在寄生虫病诊断中的应用

1||| 原理：特异性抗原刺激B淋巴细胞，与骨髓瘤细胞融合，分泌单一特异性抗体

2||| 应用：寄生虫种株分型、虫体结构与功能分析、免疫病理研究等

三、分子生物学诊断技术

1. 核酸扩增试验

聚合酶链反应（PCR）

普通PCR：特异性引物扩增DNA片段

实时荧光定量PCR（qRT-PCR）：荧光探针实时观察扩增产物

巢式PCR：两对引物进行两次扩增，提高灵敏度和特异性

等温扩增技术

环介导等温扩增（LAMP）：恒温条件下扩增DNA片段

重组酶聚合酶扩增（RPA）：利用重组酶和DNA聚合酶进行扩增

2. 生物芯片技术

基因芯片

原理：固相杂交，大规模集成的固相杂交技术

应用：疟疾、棘球蚴病等

蛋白质芯片

原理：蛋白质之间的相互作用，检测特定蛋白质

应用：疟疾、弓形虫病等

3. 基因组测序

原理：测定个体基因组中全部遗传信息

应用：寄生虫的溯源、检测及分型

4. 基于CRISPR/Cas的检测方法

原理：CRISPR引导RNA和Cas蛋白复合体特异性识别并切割靶标DNA

应用：疟疾等寄生虫病的诊断

四、组学技术

1. 基因组学

研究内容：生物体内全部基因的组成及其功能

应用：寄生虫种类鉴定、疾病诊断、药物设计和疫苗研制

2. 转录组学

研究内容：细胞中基因转录的情况及转录调控规律

应用：寄生虫发育过程中的基因调控表达、虫体与宿主的相互作用

3. 蛋白质组学

研究内容：细胞、组织或生物体在特定时空上由全部基因表达的全部蛋白质

应用：疾病状态下异常表达的蛋白、疾病不同阶段的蛋白质标志物

4. 代谢组学

研究内容：细胞、组织或生物体受到干预前后，代谢产物图谱及其动态变化

应用：寄生虫与宿主互作关系、早期诊断生物标志物和药物靶标

《人体寄生虫学》附录四寄生虫病实验诊断技术

一、病原学诊断技术

1. 粪便检查

1||| 直接涂片法

螨虫卵检查

操作步骤：生理盐水涂片，粪便涂抹，加盖玻片观察

注意事项：鉴别虫卵与粪便异物

原虫检查

滋养体检查：薄涂片，保温观察

包囊磺液染色检查：碘液染色，检查包囊与活滋养体

稳孢子虫卵囊染色检查：金胺-酚改良抗酸染色法、金胺-酚染色法、改良抗酸染色法

2||| 定量透明厚涂片法（改良加藤厚涂片法）

操作步骤：定量板取样，甘油-孔雀绿溶液透明化，镜检计数

计算公式：虫卵数×24×粪便性状系数=每克粪便虫卵数（EPC）

3||| 浓聚法

沉淀法

重力沉淀法：自然沉淀，倒去上层液，取沉渣镜检

离心沉淀法：离心后取沉渣镜检

永碘醛离心沉淀法：浓集、固定和染色

醛醛沉淀法：浓集效果好，不损伤包囊和虫卵

浮聚法

饱和盐水浮聚法：检查钩虫卵

硫酸锌离心浮聚法：检查原虫包囊、球虫卵囊等

蔗糖溶液离心浮聚法：检查隐孢子虫卵囊

4||| 毛蚴孵化法

操作步骤：粪便沉渣孵化，观察毛蚴

5||| 肛门拭子法

棉签拭子法：擦拭肛门，饱和盐水浮聚法检查

透明胶纸法：胶纸粘贴肛门，镜检

6||| 钩蚴培养法

操作步骤：滤纸培养，观察钩蚴

7||| 淘虫检查法

操作步骤：粪便过滤，检查驱除的虫体

8||| 带绦虫孕节检查法

操作步骤：孕节压平观察，子宫分支计数

《人体寄生虫学》附录四寄生虫病实验诊断技术

一、病原学诊断技术

2. 体液检查

1||| 血液检查

检查疟原虫

采血与涂片：薄血膜、厚血膜制作

固定与染色：吉姆萨染色法、快速吉姆萨染色法、瑞特染色法

检查丝虫微丝蚴

新鲜血片检查、厚血膜检查、活微丝蚴浓集法

2||| 脑脊液检查

检查阿米巴滋养体、弓形虫滋养体等

操作步骤：离心后取沉渣涂片镜检

3. 排泄物与分泌物的检查

1||| 痰液

检查卫氏并殖吸虫卵、溶组织内阿米巴滋养体等

操作步骤：直接涂片法、浓集法

2||| 十二指肠液和胆汁

检查蓝氏贾第鞭毛虫滋养体、华支睾吸虫卵等

操作步骤：直接涂片法、离心浓集法

3||| 尿液

检查阴道毛滴虫、丝虫微丝蚴等

操作步骤：离心后取沉渣镜检

4||| 鞘膜积液

检查班氏微丝蚴

操作步骤：直接涂片法、离心后取沉渣镜检

5||| 阴道分泌物

检查阴道毛滴虫

操作步骤：生理盐水涂片镜检

4. 其他器官组织检查

1||| 骨髓穿刺

检查杜氏利什曼原虫

操作步骤：穿刺抽取骨髓液，涂片染色镜检

2||| 淋巴结穿刺

检查利什曼原虫、丝虫成虫

操作步骤：穿刺抽取淋巴结组织液，涂片染色镜检

3||| 肌组织活检

检查旋毛虫幼虫、并殖吸虫等

操作步骤：取肌组织，涂片或切片染色镜检

4||| 皮肤及皮下组织活检

检查猪囊尾蚴、利什曼原虫等

操作步骤：取皮肤组织，涂片或切片染色镜检

5||| 结肠与直肠黏膜活检

检查日本血吸虫卵、溶组织内阿米巴等

操作步骤：钳取黏膜组织，涂片或切片染色镜检

《人体寄生虫学》附录四寄生虫病实验诊断技术

二、免疫学诊断技术

1. 一般免疫学诊断技术

1||| 间接血凝试验

原理：红细胞作为抗原载体，特异性抗体结合后产生凝集

应用：疟疾、阿米巴病等

2||| 乳胶凝集试验

原理：乳胶微粒作为载体，特异性抗体或抗原结合后产生凝集

应用：弓形虫病、囊虫病等

3||| 间接免疫荧光抗体试验

原理：荧光素标记第二抗体，检测抗原或抗体

应用：疟疾、丝虫病等

4||| 酶联免疫吸附试验

原理：标记的抗原或抗体与固相载体结合，显色反应

应用：多种寄生虫感染的诊断

5||| 酶联免疫斑点试验

原理：抗体捕获细胞分泌的细胞因子，酶联斑点显色

应用：临床诊断和治疗参考

6||| 免疫酶染色试验

原理：酶标记的第二抗体与特异性抗体结合，显色反应

应用：血吸虫病、丝虫病等

7||| 免疫印迹试验

原理：电泳、电转印及固相酶免疫试验结合

应用：寄生虫抗原分析和免疫诊断

8||| 免疫层析技术

原理：层析技术与抗原-抗体反应结合

应用：常见寄生虫病的快速诊断

2. 寄生虫学特殊免疫学诊断技术

1||| 诊断弓形虫感染的染色试验

原理：活弓形虫滋养体与血清反应，染色观察

应用：弓形虫病的诊断

2||| 血吸虫环卵沉淀试验

原理：虫卵内抗原与特异性抗体结合，形成沉淀

应用：血吸虫病的诊断

3||| 旋毛虫环沉淀试验

原理：旋毛虫幼虫与血清反应，形成沉淀

应用：旋毛虫病的诊断

3. 单克隆抗体在寄生虫病诊断中的应用

1||| 原理：特异性抗原刺激B淋巴细胞，与骨髓瘤细胞融合，分泌单一特异性抗体

2||| 应用：寄生虫种株分型、虫体结构与功能分析、免疫病理研究等

《人体寄生虫学》附录四寄生虫病实验诊断技术

三、分子生物学诊断技术

1. 核酸扩增试验

聚合酶链反应（PCR）

普通PCR：特异性引物扩增DNA片段

实时荧光定量PCR（qRT-PCR）：荧光探针实时观察扩增产物

巢式PCR：两对引物进行两次扩增，提高灵敏度和特异性

等温扩增技术

环介导等温扩增（LAMP）：恒温条件下扩增DNA片段

重组酶聚合酶扩增（RPA）：利用重组酶和DNA聚合酶进行扩增

2. 生物芯片技术

基因芯片

原理：固相杂交，大规模集成的固相杂交技术

应用：疟疾、棘球蚴病等

蛋白质芯片

原理：蛋白质之间的相互作用，检测特定蛋白质

应用：疟疾、弓形虫病等

3. 基因组测序

原理：测定个体基因组中全部遗传信息

应用：寄生虫的溯源、检测及分型

4. 基于CRISPR/Cas的检测方法

原理：CRISPR引导RNA和Cas蛋白复合体特异性识别并切割靶标DNA

应用：疟疾等寄生虫病的诊断

四、组学技术

1. 基因组学

研究内容：生物体内全部基因的组成及其功能

应用：寄生虫种类鉴定、疾病诊断、药物设计和疫苗研制

2. 转录组学

研究内容：细胞中基因转录的情况及转录调控规律

应用：寄生虫发育过程中的基因调控表达、虫体与宿主的相互作用

3. 蛋白质组学

研究内容：细胞、组织或生物体在特定时空上由全部基因表达的全部蛋白质

应用：疾病状态下异常表达的蛋白、疾病不同阶段的蛋白质标志物

4. 代谢组学

研究内容：细胞、组织或生物体受到干预前后，代谢产物图谱及其动态变化

应用：寄生虫与宿主互作关系、早期诊断生物标志物和药物靶标