导图社区 共聚焦使用
徕卡共聚焦系统,是一种用于生物学,基础医学,预防医学与公共卫生学领域的分析仪器。本篇详细介绍徕卡共聚焦使用方法,详细培训笔记。
介绍通过origin绘制等温滴定微量热(ITC)数据的方法,主要内容有数据类型、origin软件、最终效果图、详细作图步骤。
本图介绍详细的交通事故处理方法,含具体步骤以及常见问题解答,每个同学都值得看一看哟。
从蛋白提取到显影成像,涵盖Western blot的详细操作流程步骤,每步都有照片解说,非常适合新手。
社区模板帮助中心,点此进入>>
英语词性
法理
刑法总则
【华政插班生】文学常识-先秦
【华政插班生】文学常识-秦汉
文学常识:魏晋南北朝
【华政插班生】文学常识-隋唐五代
【华政插班生】文学常识-两宋
民法分论
日语高考動詞の活用
徕卡共聚焦使用
仪器相关
仪器是徕卡的
软件是LASX
具体使用
开机步骤
机器1
2
3
旋转钥匙至on-1
4(4是为了3方便荧光找样品)
shuttle 一般是弹起状态
中间荧光光源可开,可不开————是为了方便找样品
可以参考仪器自带的详细说明书
打开软件LAS X
machine
DMZ8
OK
acquire
开光源(用什么光源,开什么光源)
Argon功率设置成20%(负责455,488,514三波长)
如果数据处理,可以选择只开第二个(仍然是这个软件,只不过是第一栏的第二项)
关于触摸屏
图标一
图标二
明场/荧光
TL:明场
明场找样品,BF即可
荧光找样品
一半暗一半亮的图标
点击相应图标
FLUO
IL-Shutter
荧光光源例如DAPI-LP
调节光强,intensity±
注意shuttler是否开关(经常会用)
图标三
目镜/物镜
调节焦距时,如果不好判断,可看显示屏上有个焦距参考的
选择放大倍数
有个镜头一样的图标+放大镜标志
最下一排不用调(工程师调)
镜头
高倍油镜换低倍镜时,需要把油擦干,不要直接切换
检测器
新手入门从PMI2开始(中等信号接收器)
接收器荧光波长要大于激发光(一般相差10nm以上)
TLD是拍明场的
拍摄
普通拍摄
设置波长(最初开光源是基础光源)
configration
笔状
打开相应光源
acquire调节光源能量
+、-设置光序列
例如QF70与溶酶体共定位,需要三个光源
Diode 405
拍照核染色的
argon
DPSS561
设置多个波长时,分别在PMT2、PMT4里设置,为了不让两个波长冲突,在分别点seq1,seq2设置时,注意相应光源不要都打开
设置激发波长
激发
点击最右边switch to classical U
打开UVlight
用于染核
打开Visible light
用于其他波长的设置
在设置其他波长时,可以同时把这些开关都打开(调节成on),只不过有些光源的能量可以调节成0
发射
设置接收的荧光范围(双击设置接收范围)
设置光的颜色(最右边的选择DAPI、EGFP等)
或者打开之前的project,再点击应用
即便是扫描三个不同的波长(核、FITC以及溶酶体等),也可以放在一个探测器里扫描
例如用到PMT2检测器
调节焦距
最右侧z position旋扭
点击左侧第一个图标(播放+方框)
出现蓝紫色,代表过曝
调节荧光强度
调节gain
细胞、组织样品在功率20%以下就足够拍清楚
移动图片
上面左右,下面前后(指电脑图像)
最前面的按钮是调节焦距的
左右
上旋钮左转向左
上下
下旋钮向上转代表向上
图片质量方面
找图
512×512,速度200-400
正式拍照
1024×1024
speed越高,速度越开,一般200,400,600
zoom in打开,用于固定感兴趣区域
撤销时点击右边撤销箭头即可
zoom factor
Line average
一般用于提高信噪比
Line Acu
用于累加信号,拍摄样品信号很弱的
gain值
700-800
offset
一般是0
查看图片
between frames是扫描完后自动重叠在一张图片上
点击+下面的□,可以选择是让多种激光并排显示,还是单独显示一张图上
三个方框并列图片
代表每个通道一张图片
三个方框叠加
代表几个通道的图片merge
序列扫描(不用考虑窜色问题)
在acquisition最右侧一堆长方形叠加的图标
between Frames
再添加波长
3D拍照
xyz模式
z-stack
设置开始和结束的位置
一般在焦距位置上下各10um
扫描完后点3D出图
保存数据推荐project形式
可以制作3D图像,展示动画,制作视频
在保存动画时可以添加各种动作
不拍3D时,清除相关坐标设置即可“clear begin/end”
数据保存
原始文件是lif格式保存
多个图片分别保存
点击export
overlay channels
保存几个荧光通道的merge图片
save as multipage
各自保存荧光通道的图片。比如采用了三个荧光拍照,就会分别保存三个荧光通道的图片
关机
先关光源
仪器自带详细操作步骤
保存数据,关激光光源,关荧光光源,关电脑,关钥匙。等风扇停后,再把剩余开关都关了