临床标本的细菌学检验

临床微生物检验技术，血液标本、尿液标本、粪便、痰液、脑脊液、脓液、生殖道等标本的细菌学检验，微生物检验。

细菌学检验

• 血液标本
  • 标本采集运送和验收
    • 采集指征
      • 发热或低温 多以间歇弛张型
      • 白细胞增多粒细胞减少
      • 寒战
      • 血小板减少
      • 皮肤或黏膜出血
      • 新生儿可以菌血症 血培养同时做尿培养 脑脊液培养 ：老年人菌血症可能不伴有发热或体温降低 需要认真鉴别
    • 标本采集
      • 采集部位：通常为肘部采血
        • 疑似细菌性心内膜炎：肘动脉或股动脉为宜
        • 疑似伤寒病人：严格消毒后采血注入培养瓶做增菌培养
      • 采血时间
        • 怀疑细菌感染立即采集
        • 在抗菌药物使用前采集
        • 寒战高峰来临前0.5-1h采集或寒战发热后1h采集
      • 皮肤消毒程序
        • 70%异丙醇酒精擦拭静脉穿刺部位30秒
        • 1%-2%碘町作用30s或10%碘伏60s 从穿刺点向外画圈 3cm以上
        • 70%异丙醇酒精脱碘
      • 采血量
        • 每个培养瓶成人8-10ml 儿童1-3ml 婴幼儿不少于体重1%
        • 血量不够时先满足需氧瓶
      • 血培养次数
        • 1h内2-3份血培养 （同一穿刺点两瓶血为一份血培养）
        • 推荐不同部位采血 左右肘静脉颈静脉
        • 5天之内不建议重复采集
    • 标本运送
      • 立即送检 1h内放进培养箱
      • 血培养瓶在接种前后不得冷冻货冷藏
        • 脑脊液标本 怀疑有脑膜奈瑟35℃保温送检
    • 标本验收
      • 培养瓶是否渗漏破碎或明显污染
      • 瓶子标签和申请单是否相符合
      • 血液标本是否适量 血液是否凝固
  • 检验方法
  • 报告与解释
    • 阳性报告
      • 一级报告或初级报告：自动血培养仪报阳，无菌抽取肉汤2-3滴涂片，革兰染色镜检。
        • 报告镜检染色结果
      • 二级报告或中级报告：转种平板培养8-12h 获得初步鉴定和药敏报告
      • 三级报告或最终报告：质谱鉴定 菌种鉴定和药敏试验
    • 阴性报告：72h为阴性即可通知临床医生 培养至5天方可发阴性报告
      • 真菌 布鲁菌 钩端螺旋体可延长至4周
• 尿液标本p370
  • 标本采集运送和验收
    • 采集指征
      • 典型尿路感染症状
      • 肉眼脓尿或血尿
      • 尿常规检查白细胞或亚硝酸盐阳性
    • 标本采集
      • 注意事项：未使用抗生素前 保证尿液在膀胱停留4h
      • 采集方法
        • 清洁中段尿
          • 清洗会阴部 大阴唇 上包皮
          • 弃去前段尿 采集中段尿10-20ml
        • 直接导尿或耻骨上膀胱穿刺
          • 金标准
    • 标本运送
      • 容器要求：洁净 无菌 加盖 封闭 防渗漏 不含防腐剂抑菌剂
      • 注意：及时送检 不得超过2h 4℃保存不超8h（淋病奈瑟菌不可低温培养）
  • 检验流程
    • 涂片检查
      • 怀疑淋病奈瑟 假丝酵母 结核分枝杆菌 标本离心取沉渣
    • 细菌培养
      • 接种MAC或中国蓝
    • 菌落计数
      • 清洁中段尿 单种细菌菌落数
        • ＜5x10^4CFU/ml 可能污染
        • ＞10^5CFU/ml 可能感染
• 粪便标本
  • 腹泻类型
    • 吸收不良性
      • 侵犯上皮细胞和黏膜固有层 不破坏黏膜 粪便为水样
      • 致病大肠埃希菌
    • 分泌性（产肠毒素型
      • 吸附于肠粘膜表面产生毒素 不破坏黏膜 粪便水样 米泔样
      • 霍乱弧菌 产肠毒素性大肠 金葡 变形杆菌 艰难梭菌
    • 侵袭性腹泻
      • 侵入上皮细胞 破坏肠粘膜 黏液 脓血状
      • 志贺 沙门 侵袭性大肠 空肠弯曲菌 小肠结肠耶尔森
  • 标本采集运送和验收
    • 采集指征
      • 排便次数＞3次|日 粪便性状异常
      • 排便时腹痛 下坠 里急后重
      • 发热 恶心 呕吐 食欲下降
    • 标本采集
      • 每天采集一份 连送3天
      • 采集方法
        • 自然排便:挑取黏液 脓血部位2-3g
        • 直肠肛拭采集
    • 标本运送
      • 及时送检不超过2h
      • 磷酸盐甘油缓冲液或卡布运送培养基不超24h
  • 检测流程
    • 一般只检测沙门志贺
• 痰液标本
  • 标本采集运送和验收
    • 采集指征
    • 标本采集
      • 自然咳痰法
        • 起床后清水漱口用力咳出第一口痰
        • 雾化吸入45℃10%NaCl
        • 结核患者收集24h痰液送检
      • 支气管肺泡灌洗
    • 标本运送
      • 及时送检 不超2h 可置于4℃保存
      • 连续2-3天送检 24h内不重复 除非外观改变
    • 标本验收
      • 合格标本
        • 肉眼观察呈黄色 灰色 铁锈色 浑浊 稠厚混有团块或血性的标本
        • 白细胞＞25|低倍视野 鳞状上皮＜10|低倍视野
      • 不合格
        • 肉眼观察呈水样或唾液样无色透明 或混有食物残渣
  • 检测流程
    • 化脓链球菌 唯一引起喉咙发炎的细菌（其余都是病毒）
• 脑脊液标本
  • 标本的采集运送和验收
    • 采集指征
      • ①发热等全身性感染症状。②头痛、喷射状呕吐、小儿前囟饱满等颅内压升高症状。③颈项强直的脑膜刺激症状。④神经麻痹征等
    • 标本采集
      • 抗生素治疗前采集,容器不应含防腐剂,严格遵守无操作程序,防止污染
      • 脑脊液培养的同时,建议同时送血培养:用于检测细菌,脑脊液的量应不少于 Iml ,用于检测真菌或抗酸杆菌,脑脊液的量应不少于2ml
      • 留取脑脊液标本于3个无菌试管中,每个试管1~2ml
        • 第一管做病原生物学检验
        • 第二管做生化或免疫检验
        • 第三管做细胞学检验
    • 标本运送
      • 尽快(不超过1小时)送至实验室
      • 不能及时送检应放置室温切勿放冰箱,送检时应注意保温
        • 不超过24小时
• 脓液及创伤感染分泌物
  • 金葡和凝固酶阴性的葡萄球菌最常见
• 生殖道标本
  • 艾滋病-HIV
  • 淋病-淋病奈瑟菌
  • 梅毒-梅毒螺旋体
    • 硬下疳
  • 软下疳-杜克雷嗜血杆菌
  • 性病淋巴肉芽肿-沙眼衣原体
  • 非淋菌性尿道炎-支原体或衣原体
  • 尖锐湿疣-人类乳头状病毒
  • 生殖器疱疹-人类单纯疱疹病毒