1.准备工作
检查Buffer P1中是否已加入RNase A(核糖核酸酶)（催化RNA降解）取1ml Buffer P1至标有RNase A的离心管中，吹打混匀后全部加入Buffer P1中。检查Wash Solution中是否已经加入乙醇（可以沉淀质粒DNA，离心后使质粒DNA沉淀于管底，从而不会被洗去，且易挥发，易去除）。检查Buffer P2和P3是否出现沉淀
2.取4.5ml过夜培养的菌液(含质粒)，8，000×g离心2分（去除杂质）收集菌体，弃尽培养基
3.在沉淀中加入250pL Buffer P1 （作用：分散菌体，鳌合金属离子使 DNA 水解酶失活，降低细胞膜稳定性）
4.加入250ul Buffer P2(作用：降解细胞膜及乳化脂质和蛋白质，使蛋白质变性，降解 DNA 酶，细胞壁肽聚糖在碱性下水解。)，立即温和颠倒离心管5-10次混匀。室温静置2-4分钟。
5.加入350ul Buffer P3(作用：中性条件下质粒 DNA 复性，染色体 DNA 不能复性沉淀，高分子 RNA 沉淀。钾离子与 SDS 、蛋白质、膜形成复合物。),立即温和颠倒离心管5-10次混匀。(出现絮状沉淀)
6.12,000×g离心5-10分钟。将上清液移入吸附柱，8000×g离心30秒，倒掉收集管中液体。（只留下质粒DNA）
7.(选作)加入500ul Buffer DW1，9,000×g离心30秒，倒掉收集管中液体。
8.加入500ul Wash Solution（可以沉淀质粒DNA，离心后使质粒DNA沉淀于管底，从而不会被洗去，且易挥发，易去除），9,000×g离心30秒，倒掉手机管中液体。
10.空吸附柱于9，000×g离心1分钟。
(不可省略，否则残余乙醇会严重影响得率和后续实验)
11.将吸附柱放于一个干净的1.5ml离心管中，在吸附膜中央加入50-100yL Elution Buffer(洗脱缓冲液)（使质粒DNA从吸附柱上洗脱至离心管内），室温静置1分钟后，离心1分钟。保存管中质粒溶液。(置于-20℃保存）
