3T3-L细胞诱导分化

介绍3T3-L脂肪细胞诱导分化详细操作步骤图，主要包括细胞复苏、消化、分化步骤三部分内容。

3T3-L细胞诱导分化

• 细胞复苏
  • 最好用中号的小皿复苏比较合适
• 消化
  • 胰酶室温消化1-2min就够
• 分化步骤
  • 试剂耗材
    • 培养基
      • 日常培养用小牛血清培养基
      • 分化时及分化后用正常胎牛血清
    • 四种分化试剂
      • 胰岛素：1:5000； IBMX：1:100； 罗格列酮：1:10000； 地塞米松（缩写dex开头）：1:4000；
        • 具体配置方法
        • 相应溶剂
        • 相应文献
        • 具体培养基相关配置量
  • 分化步骤
    • D-3
      • 铺板
        • 接种密度
          • 文献推荐的培养方法
            • 细胞形态不规则，一般5h可以贴壁
            • 长至80%可以传代
            • 分化起点时，12孔板的接种密度是每孔0.3X10的6次方个
            • 分化起点时，6孔板的接种密度是每孔0.6X10的6次方个
          • 操作示例
            • 共聚焦皿
              • 0.03×106个/皿（对应30000个），接种后第二天长满了
            • 96孔板
              • 0.03×106个/ml，每个孔100ul
                • 接种后第二天就长满了
                  • 再稀释一倍，第二天的效果比较可以
            • 12孔板接种密度
              • 密度1
                • 0.03×106个/ml，每个孔400ul
                  • 对应12000个
              • 密度2
                • 0.03×106个/ml，每个孔200ul
                  • 对应6000个
              • 最终每个孔培养基的体积为1ml
                • 第二天观察接种密度可以
    • D-2
      • 换液
    • D0
      • 加药分化
        • 从这个开始用正常的培养基
    • D2
      • 换液、加药分化
        • 只加胰岛素
    • D4
      • 换液
        • 只加胰岛素
    • D6
      • 一般分化到D6