第六章 1.分子杂交技术[分子生物学]

第六章 1.分子杂交技术[分子生物学]

分子杂交技术

• 印迹杂交技术
  • 概念：将待测生物大分子经电泳分离转印并固定在膜上，然后用特异性识别物去识别，而后经显色反应在膜上显示出结果--印迹。
  • 关键：预杂交消除背景。将膜与预杂交液一同赋予，封闭膜上所有能与探针识别的位点。
  • 分类
    • southern blot：DNA-DNA杂交检测DNA
    • northern blot：DNA-RNA杂交检测RNA
    • western blot：抗原抗体特异性结合检测蛋白
    • eastern blot：检测蛋白质翻译后修饰，如磷酸化
    • southwestern blot：检测蛋白与DNA之间相互作用
    • Far western blot：检测蛋白质之间的相互作用
• 原位杂交技术
  • 组织原位杂交
    • 核酸探针，可对靶分子进行组织定位，对细胞通透性进行处理使探针能够进入细胞内与RNA或DNA进行杂交，可确定探针互补序列的胞内定位。
  • 菌落原位杂交
    • 适用于大量重组体筛选，从基因文库或cDNA文库中筛选目的基因。
• 生物芯片技术
  • 概念：将核酸、肽链或蛋白等生物大分子或者组织细胞制成探针，有序高密度地排列在载体上形成二维分子阵列，又称微阵列。根据分子间特异性相互作用的原理，将生物样本与生物芯片进行杂交，通过检测杂交信号实现快速、高效、高通量检测的技术。
  • 分类
    • 基因芯片
    • 蛋白芯片
    • 细胞芯片、组织芯片：可用于检测药物的靶向性
  • 芯片技术应该标记待测样本