临床执医-医学免疫学-019免疫学检测技术

这是一篇关于临床执医-医学免疫学-019免疫学检测技术的思维导图，主要内容有抗原-抗体反应相关检测技术、检测抗原的抗体的体外试验、临床执医医学免疫学019免疫学检测技术。

019免疫学检测技术

• 抗原-抗体反应相关检测技术
  • 一、抗原抗体反应特点
    • 1.高度特异性：利用这一特点，在体外可以对许多未知的生物学物质进行特异性鉴定。
    • 2.表面化学基团之间的可逆结合：抗原抗体结合除了空间构象互补外，主要以非共价方式结合。这种非共价键不如共价键结合稳定，易受外界因素的影响而解离，解离后抗原和抗体仍具有原有的特性。
    • 3.适宜的抗原抗体浓度和比例：抗原抗体在体外结合后能否出现肉眼可见的反应取决于两者适当的浓度和比例。故在具体实验过程中要适当稀释抗原或抗体，以调整两者浓度和比例，使其出现最大复合物，避免假阴性的发生。
    • 4.抗原抗体反应的两个阶段
      • 第一阶段是抗原抗体特异性结合阶段，抗原分子与抗体分子之间是互补的非共价结合，该反应迅速，可在数秒至几分钟内完成，一般不出现肉眼可见的反应。第二阶段为可见反应阶段，是小的抗原-抗体复合物之间通过正、负电荷吸引形成较大复合物的过程。此阶段所需时间从数分钟、数小时至数日不等，且易受电解质温度和酸碱度等条件的影响。
  • 二、抗原抗体反应的影响因素
    • 1.电解质
      • 抗原、抗体通常为蛋白质分子，等电点分别为pI3~5和pI5~6不等，在中性或弱碱性条件下，表面带有较多的负电荷，适当浓度的电解质会使他们失去一部分的负电荷而相互结合，出现肉眼可见的凝集块或沉淀物。实验中常用0.85%的NaCl或其他离子溶液作稀释液，以提供适当浓度的电解质。
    • 2.温度适当提高
      • 反应的温度可增加抗原与抗体分子的碰撞机会，加速抗原-抗体复合物的形成。在一定范围内，温度越高，形成可见反应的速度越快。但温度过高(56摄氏度以上)，可使抗原或抗体变性失活，影响实验结果。通常37摄氏度是抗原抗体反应的最适温度。
    • 3.酸碱度
      • 抗原抗体反应的最适pH在6~8之间，pH过高或过低，均可直接影响抗原、抗体的理化性质。此外，当抗原抗体反应液的pH接近抗原或抗体的等电点时，抗原抗体所带正、负电荷相等，由于自身吸引而出现凝集，导致非特异性反应，即假阳性反应。
• 检测抗原的抗体的体外试验
  • 概述
    • 抗原和相应抗体在体外相遇可发生特异性结合，因此可以用已知的抗原(或抗体)来检测未知的抗体(或抗原)。由于抗原物理性状或参加反应的其他成分的差异，可出现不同类型的反应。如凝集反应、沉淀反应、中和反应及免疫标记技术等。
  • 一、凝集反应
    • 凝集反应是颗粒性抗原(细菌、细胞或表面包被抗原的颗粒)与相应的抗体在电解质存在的条件下结合，出现肉眼可见的凝集团块的现象。凝集反应分为直接凝集反应和间接凝集反应两种。
    • 1.直接凝集反应：颗粒性抗原本身直接与相应的抗体反应出现的凝集现象，如红细胞凝集或细菌凝集。
    • 2.间接凝集反应：将可溶性抗原或抗体先吸附在某些颗粒载体上，形成致敏颗粒，然后再与相应抗体或抗原进行反应出现凝集的现象，称为间接凝集反应。
  • 二、沉淀反应
    • 沉淀反应是可溶性抗原与相应抗体结合后，在适当电解质存在条件下，出现肉眼可见的沉淀物。沉淀反应可在液体中进行，也可以在半固体琼脂凝胶中进行。
    • 1.免疫比浊法：一定量的抗体溶液中加入不同含量的可溶性抗原后会形成不同含量的免疫复合物，使反应体系呈现不同的浊度，根据浊度即可检测可溶性抗原的含量。
    • 2.单向琼脂扩散
      • 将已知一定浓度的抗体均匀混合于已经溶化的42~50摄氏度的琼脂中，制成凝胶板。冷却后隔适当的距离打孔，孔中加入被测可溶性抗原，任其向四周扩散。抗原与琼脂中的抗体相遇，一定时间后，在比例适宜处形成肉眼可见的白色沉淀环。由于沉淀环的直径与抗原浓度正相关，可从标准曲线中查出样品中抗原的含量。
    • 3.双向琼脂扩散
      • 将琼脂溶化制成琼脂平板，按需要打孔并分别加入抗原和抗体，任两者同时在琼脂中向四周扩散。抗原和抗体在孔之间相遇，比例适合处形成白色沉淀线。根据沉淀线的有无和形状，可鉴定两种抗原是完全相同、部分相同或完全不同。
  • 三、免疫标记技术
    • 免疫标记技术是将抗原抗体反应与标记技术相结合，将已知的抗体或抗原标记上示踪物质，通过检测标记物，间接测定抗原-抗体复合物的一类试验方法。常用的标记物有酶荧光素、放射性核素等。免疫标记技术极大地提高了检测抗原抗体反应的灵敏度，不但能对抗原或抗体进行定性和精确定量测定，而且结合光镜或电镜技术，能观察抗原、抗体或抗原-抗体复合物在组织细胞内的分布和定位。
  • 四、蛋白质芯片技术
    • 蛋白质芯片又称蛋白质微阵列，可实现快速、准确、高通量的检测。基本原理是将各种蛋白质抗原有序地固定于介质载体上为待检芯片，用标记特定荧光物质的抗体样本与芯片作用，与芯片上蛋白质抗原匹配的抗体将与之结合。再将未结合的抗体洗去，最后用荧光扫描仪或激光共聚扫描技术测定芯片上各点的荧光强度。芯片上的荧光将指示蛋白质抗原对应的抗体及其相互结合的程度。抗体芯片是指将抗体固定到芯片表面以检测相应的抗原。抗原芯片、抗体芯片在微生物感染检测和肿瘤抗原初筛中具有广泛的应用价值。
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