血液一般检验

临床基础检验技术，详细的总结了血涂片制作，血涂片染色，牛鲍式技数板，显微镜。小伙伴们赶快学习起来吧~

血液一般检验

• 血涂片制备
  • 载玻片的清洁
    • 新玻片：稀酸浸泡（去碱）、去油脂
    • 旧玻片：加洗涤剂煮、洗净
  • 制片方法
    • 手工推片法
      • 薄血膜涂片法：观察血细胞
      • 厚血膜涂片法：观察疟原虫
    • 自动涂片法
    • 制片目的：血细胞分散，便于镜下观察
    • 血滴：小米粒大小，5μL±；角度：30°-45°；速度：匀速向前，自然收尾
    • 速度越快越厚，越慢越薄
    • 甲醇的作用
      • 使细胞中的蛋白质凝固，起固定作用
      • 使细胞膜通透性增加，溶解染料
  • 注意事项
    • 拨片的标记和选择
    • 标本混匀
    • 血滴大小
    • 角度控制
    • 速度控制
  • 良好血涂片的标准
    • 厚薄适宜，分布均匀
    • 头、体、尾分明，末端拖尾呈羽毛状无颗粒划痕
    • 血膜长至少25㎜，占玻片1/3-2/3
    • 边缘整齐，两边留有空隙，约5㎜
    • 大部分白细胞形态完整、分布均匀。除部分淋巴细胞增生性疾病外，镜检区WBC破损量＜2%
    • 无人为污染
  • 血涂片的质量控制
    • 血滴大小、推片角度、推片速度
  • 血涂片不佳的原因及解决办法
• 血涂片染色
  • 染色方法
    • 瑞氏染色
      • 最常用，对细胞浆染色效果好
    • 瑞吉染色
      • 对细胞浆、细胞核着色均好，对比鲜明
    • 吉氏染色
      • 对细胞核和寄生虫着色好
  • 染料成分
    • 瑞氏染料：尹红（酸性）、美兰（碱性）
    • 吉氏染料：伊红（酸性）、天青（碱性）
  • 染色原理
    • 化学亲和、物理吸附
  • 染色目的：血细胞具有不同色彩，便于识别
  • 染色质量控制
    • 染色前
      • 血涂片：彻底干透后染色，否则染色过程易脱落；
      • 染液质量
        • 新配制的染料要成熟，天青B越多，染色效果越好
        • 瑞氏染液：成熟指数RA=1.3±0.1为宜
        • 染液存放于棕色瓶，以免甲醇挥发或氧化为甲酸
    • 染色中
      • 时间与浓度、染色过程、pH（缓冲液pH 64~6.8）、冲洗染液、脱色与复染
    • 染色后
      • 效果评价、染色不佳原因及纠正措施（染料沉积：蜡笔画线使染料充足、时间、冲洗
• 牛鲍氏计数板
  • 结构
  • 使用（计数原则）
    • 使遵循一定的方向（如反“S”型）---防止漏数、重复数
    • 数两邻边舍两邻边（如：数上不数下、数左不数右）
    • 浓度公式：红细胞数/L=N×5×10×201×106
  • 充池
    • 器材
      • 微量吸管＋带孔的吸头
    • 原理
      • 毛细虹吸现象（表面张力）
    • 要点
      • 发挥最大表面张力---计数板和盖玻片干净干燥
      • 刚好充满计数池，过少分布不均，过多溢出---液体量7~8μL
      • 避免多次充引起的分布不均---形成液滴，一次性充好
      • 充池后，盖片固定不移动
• 显微镜
  • 结构
    • 机械系统
      • 镜座、镜柱、镜臂、调焦系统、镜筒、物镜转换器、载物台、压片夹
    • 光学系统
      • 光源、聚光器、遮光器、物镜、目镜
  • 使用
    • 焦距调节
      • 粗/细准焦螺旋
    • 光线调节
      • 聚光器、遮光器、光源
    • 油镜使用
      • 低/高倍镜选好涂片上适当的位置
      • 将聚光器升至最高、调节至合适光亮
  • 维护
    • 绸布擦拭机械部分，光学部分擦镜纸
    • 油镜使用后及时擦拭