生物化学-蛋白质

生物化学-蛋白质的思维导图，内容有蛋白质的共价结构、蛋白质的三维结构、蛋白质的结构与功能的关系、蛋白质的分离纯化和表征，一起来看。

蛋白质

• 蛋白质的共价结构
  • 蛋白质通论
    • 蛋白质的组成和分类
      • 蛋白质平均含氮量为16%，蛋白质含量=蛋白氮\*6.25 - 单纯蛋白质 仅由氨基酸组成 - 缀合蛋白质 除氨基酸外含有其他各种化学成分作为结构的一部分
    • 蛋白质的形状和大小
      • - 纤维状蛋白质 在生物体内主要起**结构**作用，不溶于水和稀盐溶液 - 球状蛋白 形状接近球形或椭球形，疏水氨基酸侧链位于分子内部。水溶液中溶解性较好 - 膜蛋白 疏水氨基酸侧链伸向外部，不溶于水溶于去污剂
    • 蛋白质构象和蛋白质结构的组织层次
      • - 一级结构 多肽链的**氨基酸序列**。多肽链**主链上共价连接的氨基酸**残基决定 - 二级结构 多肽链**主链**借助**氢键**进一步折叠盘绕成的**局部**规则或不规则**构象**。主要包含α-螺旋和β-折叠片 - 三级结构 在二级结构的基础上，多肽链借助**非共价键**进一步弯曲、折叠成有**特定走向**的**紧密球状实体** - 四级结构 寡居蛋白质中各亚基之间在空间上的相互作用关系和结合方式。 - 二级结构和其他高级结构主要是由非共价力（氢键、离子键、范德华力、疏水作用力、二硫键）决定的
    • 蛋白质功能的多样性
      • - 催化 酶 - 调节 调节蛋白，调节其他蛋白执行生理功能 - 运输 从一地到另一地特定转运的物质 - 贮存 必要时利用蛋白质提供充足氮素 - 运动 某些蛋白质赋予细胞运动能力，如肌肉收缩和细胞游动 - 结构成分 给细胞和组织提供强度和保护 - 支架和衔接作用 支架蛋白（接头蛋白），在细胞应答激素和生长因子的复杂途径中起作用 - 防御和进攻 免疫球蛋白（抗体） - 异常功能 应乐果有极高的甜度
  • 肽
    • 肽和肽键的结构、物理化学性质
      • - 两氨基之间的酰胺键称为肽键，具有部分双键性质，不能自由旋转 - 组成肽键的4个原子和2个相邻Cα处于同一平面，形成**肽平面（酰胺平面）** - 双缩脲反应 含肽键化合物特有，在碱溶液中与硫酸铜形成蓝紫色化合物（λ=540nm）
    • 天然存在的活性肽
      • - 谷胱甘肽 组成 1谷氨酸+1半胱氨酸+1甘氨酸 生理功能 **解毒**；参与**氧化还原**反应；维持**巯基酶**活性；维持**红细胞结构**稳定 - 催产素 子宫、乳腺平滑肌收缩，催产和促进乳腺排乳 - 升压素 促进**血管平滑肌收缩**，升高血压，减少排尿 - 脑啡肽 镇痛作用，强于吗啡，不上瘾 - 内啡肽 吗啡样活性，镇痛作用 - 抗菌素酶 破坏细菌细胞壁粘肽的合成
  • 蛋白质一级结构测定
    • 蛋白质测序的策略
      • - 测定蛋白质分子中**多肽链数目** 通过测定**末端氨基酸残基摩尔数**与蛋白质分子量之间关系 - **拆**分蛋白质分子的**多肽链** 8mol/L**尿素**或6mol/L**盐酸胍** - **断**开多肽链内**二硫键** **氧化剂或还原剂**断裂 - 分析每一**多肽链氨基酸组成** 测每条多肽链组成，计算氨基酸成分的分子比 - 鉴定多肽链**N-和C-末端残基** - 裂解多肽链为较**小片段** 采用两种或多种断裂方法，断裂成两套或多套肽段 - 测定各肽段的**氨基酸序列** 常用Edman降解法 - **重建**完整的多肽链**一级结构** 利用两套或多套肽段的氨基酸顺序彼此间的交错重叠，拼凑完整的多肽链氨基酸顺序 - 确定**二硫键位置** 胃蛋白酶处理没有断开二硫键的多肽链，双向电泳分离肽段，过甲酸处理使S-S断裂，对每个肽段进行组成及顺序分析
    • 鉴定多肽链N-和C-末端残基
      • **N-末端分析** - DNFB法 弱碱溶液，肽链N端与DNFB生成**二硝基苯衍生物**，反应生成物为**黄色** - DNS法 弱碱条件，DNS-CL与蛋白质多肽链N端游离氨基酸反应，生成**DNS-肽**。再在酸性条件下水解，生成**DNS氨基酸**，用乙酸乙酯抽提，**DNS-氨基酸发出强烈荧光**，且水解后产物可进行**纸电泳或薄层层析** - PITC法（Edman降解法） 在弱碱性条件下PITC与蛋白质多肽链N端氨基酸的氨基作用，苯氨基硫甲酰多肽或蛋白质；再在酸性条件下使N端PTC-氨基酸环化形成苯乙内酰氨基酸，从多肽链上脱落。反应产物PTH氨基酸可用薄层层析或气象色谱进行游离C-末端氨基酸可用DNFB法进一步鉴定。 - 氨肽酶法 肽链外切酶，从多肽链N端逐个向里切 **C-末端分析** - 肼解法 蛋白质或多肽与无水肼加热发生肼解 - 还原法 **硼氢化锂** 还原 α-氨基醇 - 羧肽酶法 最有效最常用；**肽链外切酶**，专一性C-末端逐个降解，释放**游离氨基酸**。被释放的游离氨基酸的数目和种类随反应时间而变化。根据释放的氨基酸数与反应时间的关系，便可知道C-末端氨基酸序列。
    • 二硫键的断裂
      • - 过甲酸氧化法/巯基化合物还原法 - 氧化剂和还原剂（巯基乙醇、巯基乙酸、二硫苏糖醇等）都可打开二硫键
    • 氨基酸组成的分析
      • 待测样品完全水解，用氨基酸分析仪测定
    • 多肽链的部分裂解和肽段混合物的分离纯化
      • 将多肽链裂解成较小片段，分离，测定每一肽段的氨基酸序列 **酶法裂解** - 胰蛋白酶 - 糜蛋白酶 - 嗜热菌蛋白酶 - 胃蛋白酶 - 木瓜蛋白酶 **化学法裂解** - 溴化氢断裂 - 羟胺断裂 - 肽段的分离纯化：上述方法断裂后，所得肽段混合物用**凝胶过滤、凝胶电泳和高效液相色谱**等方法进行分离纯化
    • 肽段氨基酸序列的测定
      • - Edman化学降解法 - 酶降解法 肽链外切酶逐个切，由此推定 - 质谱法 灵敏度高、所需样品少、测定速度快 - 根据核苷酸推定法
    • 肽段在多肽链中次序决定
      • 通过**重叠肽**（跨过缺口而重叠的肽段）测定肽段在原多肽链中位置，拼凑出整个氨基酸序列
    • 二硫桥位置测定
      • - 胃蛋白酶处理蛋白质，得到含有二硫键或二硫桥的较小肽段 - 对角线电泳分离各肽段
• 蛋白质的三维结构
  • 研究蛋白质构象的方法
    • **X射线衍射法**：测定蛋白质的三维晶体结构
    • 研究溶液中蛋白质构象的光谱学方法
      • - 紫外差光谱 - 荧光和荧光偏振 - 圆二色性 - 核磁共振 在原子水平上揭示蛋白质和其他分子的三维结构
  • 稳定蛋白质三维构象的作用力
    • - 氢键 一个电负性很强的原子共价结合的氢原子与另一个电负性很强的原子之间相互吸引形成的次级键；稳定蛋白质二级结构的主要作用力；特点：**饱和性、方向性** - 范德华力 引力和斥力的总和；包括**定向效应、诱导效应、分散效应**三种较弱的作用力范德华距离 两个原子的范德华半径之和，两个非共价结合原子处于一定距离时最大 - 疏水作用 球状蛋白质在**水介质**中折叠时将**疏水残基埋在分子内部**的现象 - 离子键 正电荷与负电荷的一种疏水相互作用 - 二硫键 分子中两个半胱氨酸的巯基氧化形成的典型**共价键**结构
  • 多肽主链折叠的空间限制
    • **酰胺平面** 肽键是一个共振杂化体。共振的结果是肽链具有部分双键性质，不能绕键正常旋转，因此主链形成刚性平面，即酰胺平面。酰胺平面内C=O和N-H反式排列，各原子由固定的键长键角。
  • 蛋白质的二级结构：多肽链折叠的规则方式
    • 定义 蛋白质的二级结构指**肽链主链**的**不同区段**通过自身相互作用形成**氢键**，沿某一主链**折叠盘旋**形成的局部空间结构。是蛋白质的构象单元。
    • α-螺旋
      • - 最常见、典型、含量最丰富 - 多肽链主链原子沿一中心轴折叠盘绕所形成的有规律的螺旋构象 - 每圈3.6个氨基酸残基；螺距为0.54nm，两个氨基酸之间垂直距离为0.15nm，每个残基旋转100℃ - 螺旋以链内氢键维持 - R侧链基团伸向螺旋外侧 - 每个氨基酸残基的N-H与前面第三个残基的C-O形成氢键，肽链上所有肽键参与氢键的形成，取向平行于螺旋轴 - 脯氨酸不参与形成α-螺旋，使之弯转 - 多数为稳定的右手螺旋，少数为左手螺旋 - 影响α-螺旋形成因素
    • β-折叠
      • - 两条或多条伸展的多肽链侧向聚集，通过相邻肽链主链上的NH和C-0之间有规律的氢键，形成锯齿状片层结构，即β-折叠片。
    • β-转角
      • - 多肽链氨基酸残基n的羰基碳氧与残基（n+3）的氮原子上的氢之间形成氢键，肽键回折180° - β-转角是多肽链回折180°部分形成的二级结构，多数处于蛋白质分子表面 - 回折部分通常为四个氨基酸残基构成，多为甘氨酸、脯氨酸
    • 无规则卷曲
      • 多肽链主链部分形成的无规则的卷曲构象
  • 纤维状蛋白
    • 广泛分布与脊椎和无脊椎体内，动物体内支架和外保护成分，占脊椎动物体内蛋白总含量一半或一半以上。外形纤维状或细棒状。
    • 分类
      • - 不溶性（硬蛋白） 角蛋白、胶原蛋白、弹性蛋白 - 可溶性 肌球蛋白（不包括微管）、血纤蛋白原 **α-角蛋白** **丝心蛋白和其他β-角蛋白** **胶原蛋白：一种三股螺旋** - 含有高量的Gly和Pro，并含有3种不常见的氨基酸（4-羟脯氨酸、3羟脯氨酸、5-羟赖氨酸） - 三条α-链的多肽链（左手螺旋）缠绕成三股螺旋，为右手超螺旋 - 三股螺旋是一种能容纳胶原蛋白特有氨基酸组成和序列的结构，很长区段由Gly-x-y氨基酸残基序列重复而成。 - **弹性蛋白** 结缔组织中可溶性单体合成的有弹性的蛋白 **肌球蛋白和原肌球蛋白** 棒状分子，由6条多肽链组成，多个肌球蛋白分子通过尾区间的离子相互作用形成骨骼肌的粗丝
  • 超二级结构和结构域
    • 超二级结构
      • **定义** 在蛋白质分子中，若干相邻的具有二级结构的肽段有规则得组合在一起，形成空间构象上能彼此区别的二级结构组合单位，称为超二级结构或模体。在多种蛋白质中充当三级结构的构件 **常见类型** - α-螺旋聚集体（αα型） 两股平行或反平行的右手螺旋折叠缠绕形成的左手螺旋卷曲 - βαβ型 由两段平行的β-折叠通过一段α-螺旋连接形成的结构，β螺旋由氢键相连 - ββ型 一条多肽链的若干β折叠反平行而成的结构，两个β股间通过短回环（发夹结构）连接起来
    • 结构域
      • **概念** 由几个超二级结构单位折叠组装成的特定结构区域，结构层次位于超二级结构和三级结构之间。结构域是球状蛋白质的独立折叠单位；也指功能域，蛋白质分子中能独立存在的功能单位。功能域由一个或多个结构域组成 运动 **类型** - 反平行α-螺旋结构域 全α-结构 - 反平行或混合型β折叠片结构域 α，β-结构 - 反平行β-折叠片结构域 全β-结构 - 富含金属或二硫键结构域：不规则小蛋白结构
  • 球状蛋白和三级结构
    • 概念 蛋白质在二级结构基础上进一步折叠盘旋形成具有一定空间结构的球状实体。包括多肽链中所有原子的空间排布
    • 球状蛋白质分类
      • - 全α-结构域 - α，β-结构结构域 - 全β-结构域
    • 球状蛋白质的三维结构特征
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  • 膜蛋白的结构
    • 外周膜蛋白
      • 分布在膜脂双分子层表面，主要通过膜内在蛋白质的静电、蛋白质相互作用和氢键键合作用与膜结合 属于可溶性球状蛋白质
    • 内在膜蛋白
      • 具有单个跨膜肽段的膜蛋白，通过一小段疏水肽链锚定于膜，蛋白质的大部分位于膜的一侧或两侧伸展于水环境中 具有7个跨膜肽段的膜蛋白：外形近似球形，大部分蛋白质埋在膜中，小部分暴露于溶剂水中 脂双层疏水核心的内在膜蛋白的结构主要由α螺旋或β折叠片构成
    • 脂锚定膜蛋白
      • 蛋白质与脂分子共价连接，脂质部分插入脂双层
  • 蛋白质的折叠和结构预测
    • 蛋白质的变性
      • - 天然蛋白质分子受到某些物理化学因素影响时生物活性丧失、溶解度降低、不对称性增高以及其他物理化学常数发生变化的过程。 - 蛋白质变性实质是蛋白质分子中次级键被破坏，天然构象解体，一级结构保持完好  **变性剂** - 尿素和盐酸胍 - 去污剂
    • 蛋白质一级结构决定三维结构
      • 蛋白质的复性：除去蛋白质变性因素后，变性蛋白质重新恢复到天然构象
    • 蛋白质折叠的动力学
      • **分子伴侣** 酶或辅助性蛋白质，指导新生肽链的正确折叠 **分子伴侣作用** - 封闭折叠肽链的疏水区段 - 创建隔离环境，使肽链折叠互不干扰 - 促进肽链折叠和去凝集 - 遇到应激刺激，使已折叠蛋白质去折叠 种类 - 热激蛋白 - 伴侣蛋白  -
  • 缔合亚基和四级结构
    • - 蛋白质四级结构 具有一、二、三级结构的肽链通过非共价结构连接起来的结构形式 - 维系四级结构的是非共价键 - 亚基 四级结构中每一条多肽链称为亚基；两个亚基为二聚体蛋白 - 四级结构的驱动力 四级缔合在结构和功能上的优越性
• 蛋白质的结构与功能的关系
  • 肌红蛋白Mb的结构与功能
    • 肌红蛋白的三级结构
      • - 一条多肽链和一个辅基血红素构成，除去血红素的脱辅基肌红蛋白称为珠蛋白 - 致密紧实，分子内部只有一个能容纳4个水分子的空间
    • 辅基血红素
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    • 肌红蛋白氧结合曲线
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  • 血红蛋白的结构与功能
    • 血红蛋白的结构
      • - 主要功能为在血液中结合并运输氧气 - 4个多肽亚基蛋白。每个亚基有一个血红素和一个氧结合部位 - 成人血红蛋白主要是HbA
    • 氧结合引起的血红蛋白构象改变
      • 氧合作用改变了血红蛋白的四级结构，血红素的微小移动导致血红蛋白的转换。血红蛋白存在两种构象态：T态和R态 - O2对R态血红蛋白的亲和力明显高于T态，氧结合更稳定了R态 - 缺氧时T态更稳定，因此T态是去氧血红蛋白的主要构象 - R态是氧合血红蛋白的主要构象，R态血红蛋白结合氧后使分子内一些盐桥断裂
    • Hb氧结合曲线
      • 血红蛋白的氧合具有正协同性同促效应，即血红蛋白结合一个O2后增强其他氧结合部位对O2的亲和力
    • H+、CO2、BPG对血红蛋白结合氧的影响
      • **波尔效应：H+、CO2促进O2的释放** - 组织中代谢作用产生H+和CO2，代谢越旺盛的组织，需要O2越多，产生H+和CO2越多 - 意义 血液流经代谢旺盛的肌肉组织时，肌肉中pH较低，CO2浓度较高，有利于血红蛋白释放氧气，使组织得到更多的氧气，而氧气的释放促进血红蛋白与氢质子和二氧化碳结合，降低pH，起缓冲血液pH的作用；血液流经肺部时，肺部氧气多，有利于血红蛋白与氧气的结合，并因此促进了CO2和H+的释放，CO2的释放有利于氧合血红蛋白的生成 -
  • 血红蛋白分子病
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  • 免疫系统和免疫球蛋白
    • 免疫系统
      • 分为体液免疫系统和细胞免疫系统 - 体液免疫系统 针对细菌感染、胞外病毒和进入生物体的外来蛋白 - 细胞免疫系统 破坏被病毒感染的宿主细胞 某些寄生生物和外来的组织
    • 免疫系统能识别自我和非我
    • 在细胞表面的分子相互作用引发免疫反应
    • 免疫球蛋白的结构和类别
      • 免疫球蛋白lgG是血清中最基本的一类抗体 
    • 基于抗体-抗原的生化分析方法
      • - 多克隆抗体 由多个不同的B淋巴细胞应答一个抗原。B淋巴细胞群中每个细胞产生结合抗原中特异的不同的抗原决定簇的抗体。因此多克隆抗体是识别一个蛋白质（抗原）的不同表位的多种抗体的混合物。 - 单克隆抗体 同一B细胞群体合成分泌的。均一，所有抗体识别同一表位。 - 免疫印迹 Western印记，对蛋白质样品进行凝胶电泳分离，然后将凝胶板与硝酸纤维素膜贴在一起，进行电泳转移，将凝胶上的蛋白质条带印在凝胶膜上。将纤维封闭，继而用第一抗体、酶标第二抗体处理。只有待测蛋白质条带显示颜色。免疫印迹能检测样品中微量成分和相对分子质量。 - ELISA(酶联免疫吸附测定) 能快速筛查和定量一个抗原在样品中的存在 原理：以待测抗原和酶标抗体的特异结合反应为基础，然后通过酶活力测定抗原（或抗体）含量。 基本步骤：
  • 肌球蛋白、肌动蛋白与肌肉收缩
  • 蛋白质的结构和功能进化
    • - 同源蛋白质 不同物种中行驶相同或相似功能的蛋白质 - 序列同源性 同源蛋白质中氨基酸序列具有明显相似性 - 可变残基与不变残基 同源蛋白质的氨基酸序列许多位置的氨基酸残基对许多物种不同/相同 
• 蛋白质的分离纯化和表征
  • 蛋白质的酸碱性质
    • 蛋白质的电解质性质
      • 蛋白质分子由氨基酸组成，由于游离的α-NH3和α-COOH，为两性电解质，即既能和酸作用也能和碱作用。 蛋白质分子的可解离基团主要来自侧链的功能基团。
    • 蛋白质的等电点
      • - 蛋白质所携带正电荷总数与负电荷总数相等即静电核数为0时的pH - 蛋白质在电场中既不向正极也不向负极移动 - 等电点时，蛋白质溶解度最小
    • 蛋白质的等离子点
      • 在没有其他盐类干扰情况下，蛋白质质子供体解离出来的质子数与质子受体基团结合的质子数相等时的pH，是蛋白质的特征常数
  • 蛋白质的大小与形状
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  • 蛋白质的胶体性质与蛋白质沉淀
    • 蛋白质的胶体性质
      • 蛋白质分子量很大，在水中能形成胶体溶液 蛋白质具有亲水溶胶的性质 蛋白质表面的水化膜和表面电荷是稳定蛋白质亲水溶胶的两个重要因素
    • 蛋白质的沉淀
      • 蛋白质在溶液中的稳定性是有条件的、相对的 条件发生改变，破坏了蛋白质溶液的稳定性，蛋白质从溶液中沉淀出来，蛋白质溶液的稳定性与质点大小、电荷和水化作用有关。 蛋白质溶液中加入脱水剂以除去它的水化层，或改变，或者改变溶液的pH达到蛋白质的等电点使质点失去携带相同净电荷或加入电解质破坏双电层，那么蛋白质分子就会凝集成大的质点而沉淀。
    • 沉淀蛋白质的方法
      • - 盐析法 向蛋白质溶液中加入大量中性盐，使蛋白质脱去水化层而聚集沉淀。盐析沉淀一般不引起蛋白质变性 - 有机溶剂沉淀法 向蛋白质溶液中加入一定量的有机溶剂，因引起的蛋白质脱去水化层以及降低介电常数而增加带电质点间的相互作用，致使蛋白质颗粒容易凝集而沉淀 - 重金属盐沉淀法 溶液pH大于等电点时，带负电荷，与金属离子形成不溶性盐沉淀 - 生物碱试剂和某些酸类沉淀法 - 加热变性沉淀法 - 等电点沉淀 处于等电点时溶解度最小
  • 蛋白质分离纯化的一般原则
    • 蛋白质的分离步骤
      • - 蛋白质的机械破碎：研磨法、超声波法、冻融法、酶解法 - 抽提：水溶性蛋白用中性缓冲液抽提；酸性蛋白用稀碱性溶液抽提；脂溶性蛋白用表面活性剂抽提 - 粗提：离心除去固体杂质后，沉淀、超滤、萃取法处理 - 精制 层析法、电泳法 - 成品加工：测定蛋白质性质并干燥成品
  • 蛋白质的分离纯化方法
    • 根据分子大小不同的纯化方法
      • - **透析和超滤** 透析：利用蛋白质分子不能通过半透膜的性质，分离蛋白质和小分子物质（如无机盐和单糖） 超滤：利用压力或离心力，强行使小分子物质通过半透膜，将蛋白质分子截留在半透膜上，以浓缩或脱盐 - **密度梯度离心** 蛋白质颗粒在具有密度梯度的介质离心时，质量和密度大的颗粒比质量和密度小的颗粒沉降快。每种蛋白沉降到与自身密度相等的介质密度梯度时停滞，最终离心管中被区分成不同的区带 - **凝胶过滤** 
    • 利用溶解度差别的纯化方法
      • - 等电点沉降和pH控制 等电点沉降：当蛋白质处于等电点时，其净电荷为0。相邻蛋白质分子之间没有静电斥力而趋于聚集沉淀。pH调等电点pH，高于或低于该pH的蛋白质则留在该溶液中。这些沉淀出来的蛋白质保持天然构象，能重新溶解于适当的pH和一定浓度的盐溶液中。 - 蛋白质的盐析和盐溶 盐溶：低浓度时，中性盐增加蛋白质的溶解度 盐析：当溶液的离子强度增加到一定数值时，蛋白质溶解度开始下降。当离子强度足够高时，蛋白质从水溶液中沉淀出来的现象 - 有机溶剂分级分离法 与水互溶的有机溶液使蛋白质在水中的溶解度显著降低，伴随着蛋白质的沉淀和变性 - 温度对蛋白质溶解度的影响 大部分球蛋白，0~40℃溶解度随温度升高而增加；40~50℃变得不稳定而变性；一般中性pH介质中失去溶解能力 大多数蛋白质在低温下稳定，分离操作一般在0℃或更低温度下进行
    • 根据电荷不同的纯化方法
      • - **电泳** 在外电场的作用下，带电颗粒向与其所带电性相反的电极方向移动 按支持物的物理性状分类 - **双向电泳** 氨基酸混合物特别是寡核苷酸混合物一次电泳往往不能分开，**将第一次电泳分开的斑点通过支持介质的接触印记转移到第二个支持介质上**，旋转90°，进行第二次电泳。 -  - **SDS-PAGE** - **毛细管电泳** 用于分离多种生物分子，包括氨基酸、蛋白质、肽、DNA片段、核酸及多种小分子，也可分离手性化合物。 电渗作用使溶液向负极移动。电渗流很强，使所有正、负、中性离子向负极移动 - **等电聚焦** - **层析聚焦** 根据蛋白质等电点差异分离蛋白质混合物。高分辨率，操作简便。 - **离子交换层析** 交换葡聚糖离子层析 交换阴离子层析：层析管中填充阴离子交换树脂，由于阴离子交换树脂颗粒上带正电荷，吸引溶液中阴离子。用含有阴离子的溶液洗柱，含负电量小的蛋白质首先被洗脱；增加阴离子浓度，含负电量大的溶液被洗脱，两种蛋白被分开。
    • 利用选择性吸附的纯化方法
    • 利用配体的特异性亲和力的纯化方法
      •  **类型** - 抗原和抗体 - 激素和受体蛋白 - 凝集素和糖蛋白 -
    • 高效液相层析和快速蛋白液相层析
      • - 高效液相层析HPLC:层析基础上改进，用于蛋白质及其他分子的分析制备 - 反向HPLC：流动相是相对极性的，固定相是非极性的，用于分离药物及代谢物、杀虫剂、氨基酸、肽等非极性物质等 - 快速蛋白液相层析FPLC：专门用于蛋白质的分离（基于反相、亲和、排阻、疏水作用、离子交换层析、等电聚焦等层析）