导图社区 细胞破碎
细胞破碎的思维导图，细胞破碎分机械破碎（物理破碎、化学破碎、生物破碎）和非机械破碎，希望这份脑图会对你有所帮助。
细胞质基质与内膜系统的思维导图，：在真核细胞的细胞质中除去可分辨的细胞器以为的胶状物质，称为细胞质基质；内膜系统包括内质网，高尔基体，溶酶体，胞内体，和分泌泡等。
物质的跨膜运输的思维导图，介绍了被动运输和主动运输，还有大分子或颗粒的跨膜运输，本知识大家可以学起来哦。
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民法分论
细胞破碎及其分离
细胞破碎
非机械破碎
物理破碎
原理：通过物理因素的作用，使组织，细胞的外层结构破坏，使细胞破碎
温度差破碎法
冻结-融化法
机理：破坏细胞膜的疏水键增加亲水性和通透性
适用范围：细胞壁较脆弱的菌体
干燥法
冷冻干燥
空气干燥
真空干燥
压力差破碎法
渗透压冲击法
原理：由于渗透压的变化使细胞快速膨胀而破裂
特点：反应条件温和，成本低
适用范围：无细胞壁的细胞和细胞壁较脆的细胞或细胞壁经酶预处理的细胞
化学破碎
原理：通过各种化学试剂对细胞膜作用使细胞破碎
有机溶剂
特点：产物有释放一定选择性，细胞外形完整
表面活性剂
特点：产物释放有一定选择性，细胞外形完整
酸碱处理
特点：成本低
生物破碎
原理：通过细胞本身的酶系或外加的酶制剂的催化作用使细胞外层结构受到破坏，使细胞破碎
自溶法
特点：利用生物体自身产生的酶来溶解
外加酶法
特点：专一性强，选择性释放产物，条件温和，细胞外形完整
机械破碎
原理：通过机械运动产生的剪切力使组织，细胞破碎
喷雾撞击破碎
原理：通过撞击板撞击的瞬间使细胞破碎程度均匀
适用范围：大多数微生物细胞和植物细胞的破碎
珠磨
原理：进入珠磨机，通过相互碰撞产生的剪切力使细胞破碎
适用范围：细胞悬浮液和植物细胞的大规模破碎
高压匀浆
原理：高压-突然减压，高速撞击冲击坏
适用范围：适于酵母菌和大多数细胞破碎，不适合团状菌和丝状菌
微波破碎
原理：对微波的吸收能力存在显著差异，从而导致微波场中的细胞局部受热，使细胞内压力增大使细胞出现缺口而破碎
超声波破碎
机理：空穴现象
适用范围：实验室小规模的细胞破碎
包涵体
含义：包涵体使一种蛋白质不溶性的聚集体
包涵体的形成
蛋白过量积聚，超过溶解度，导致沉淀
蛋白合成太快，导致分子间的疏水基团相互作用而聚集沉淀
蛋白质合成太快，分子内二硫键错误链接导致沉淀
表达蛋白过多，与其结合/诱导不足不能形成溶解状态
蛋白质自身不稳定
包涵体的洗涤
洗涤剂：溶解去除部分膜蛋白和脂类杂质
洗涤剂的浓度：以溶解杂质，不溶解包涵体中的目标产物为原则
常用的低浓度变性剂
1MEDTA
2M尿素
常用的温和表白活性剂
TrixonX-100
包涵体的溶解
包涵体中不溶性的目标蛋白必须溶解到液相中，一般水难以溶解只有采用蛋白质变性才能使其形成可溶性形式
常用方法
高浓度变性剂
5-8M盐酸胍和6-M尿素
1%-2%SDS
极端ph
ph＞9.0的碱溶液和有机溶剂
还原剂
巯基乙醇，二硫苏糖醇
包涵体的复性
通过缓慢去除变性剂使目标蛋白从变性的完全伸展状态恢复到正常的折叠结构，同时去除还原剂使二硫键正常形成
稀释复性法
将变性蛋白分批次加入到复性缓冲液中
透析复性法
通过降低透析液的浓度来控制变性剂的去除速度
超滤复性法
选择合适截留分子量的膜，使其允许通过变性剂通过而蛋白质不通过
色谱复性法
利用色谱柱辅助蛋白质复性的方法
吸附型层析复性
凝胶过滤复性
分子伴侣法
体内复性
在工程菌培养的工程中同时加入分子伴侣的基因进行共同表达
体外复性
将包涵体溶解后，再加入分子伴侣帮助折叠
