导图社区 冷冻电镜操作手册(Talos F200C G2)
针对生物场型发射投射电镜(Talos F200c G2)看冷冻样品的操作指南。涉及上样下样,软件操作,冷冻样品杆的维护等内容。操作细节充分,新手老手通用。
编辑于2021-07-02 10:59:01美国质量协会“六西格玛黑带”培训资料:第七章,介绍了常用项目团队管理工具,包括了成人学习 Adult Learning,沟通管理 Communication Management,会议管理 Meeting Management,RACI矩阵,冲突解决 Conflict Resolution,力场分析 Force-field Analysis,群体思维 Group Thinking等内容。同时附有课后习题和答案~
美国质量协会“六西格玛黑带”培训资料:第六章 质量成本和财务管理,介绍了财务敏感性分析,净现值,成本效益分析,投资回收期,资产收益率,投资收益率,质量经济学,质量成本的分类等内容。同时附有课后习题和答案。
美国质量协会“六西格玛黑带”培训资料:第五章,介绍了常用质量管理和计划工具,包括SIPOC 图,SMART原则,三点估算法(Three-point Estimation)(计划评审技术 PERT),甘特图 Gantt Chart,活动网络图 Activity Network Diagram,因果图 Cause-and-Effect Diagram,流程图 Flow Chart等内容。同时附有课后习题和答案~
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美国质量协会“六西格玛黑带”培训资料:第七章,介绍了常用项目团队管理工具,包括了成人学习 Adult Learning,沟通管理 Communication Management,会议管理 Meeting Management,RACI矩阵,冲突解决 Conflict Resolution,力场分析 Force-field Analysis,群体思维 Group Thinking等内容。同时附有课后习题和答案~
美国质量协会“六西格玛黑带”培训资料:第六章 质量成本和财务管理,介绍了财务敏感性分析,净现值,成本效益分析,投资回收期,资产收益率,投资收益率,质量经济学,质量成本的分类等内容。同时附有课后习题和答案。
美国质量协会“六西格玛黑带”培训资料:第五章,介绍了常用质量管理和计划工具,包括SIPOC 图,SMART原则,三点估算法(Three-point Estimation)(计划评审技术 PERT),甘特图 Gantt Chart,活动网络图 Activity Network Diagram,因果图 Cause-and-Effect Diagram,流程图 Flow Chart等内容。同时附有课后习题和答案~
冷冻电镜操作手册(Talos F200C G2)——山火
前期准备
结束Bake Out
1. 先把杜瓦罐上的黑色旋钮关上
2. 温控仪面板,点Stop
3. 关闭真空仪上的黑色旋钮
4. 把透明管子拔下来,重新插到真空仪上
摆放好所需器具
确保所有东西都是干的
workstation
把上样台从干燥柜里拿出来,放到workstation里面
上样台的口要对准样品杆伸出来的洞
结束Warm Up
V1 V2依次旋平,把样品杆拔下来
取的时候注意靠下,避免碰到Pin
把冷冻样品杆推进 workstation中,注意卡紧
把真空泵复原
插上堵头
先开V1 拧成竖直,再拧成水平
再开V2,拧成竖直
V1慢慢拧成竖直,不要让指针有大的波动
上样
workstation
先用空滤纸盒把右边垫高,避免液氮倒流
预冷上样台和杜瓦罐:轮流加入液氮
上样台和杜瓦罐分别盖上盖子,让其预冷
液氮会噗一次,注意不要冻伤手
烘片机
把2个绿色小镊子,夹片杆,堵头,夹片环,小头螺丝刀和两把大镊子,放在烘片机上加热烘干水分
夹片杆:可以拧成扇形,放松夹片环;拧成蝴蝶型,夹紧夹片环
上样
把box从保温杯转移到上样台
坐下,打开shutter,把样品孔露出来
用一把大镊子把box从保温杯里夹出来
先预冷大镊子,等其不冒泡泡
夹住所需box,快速放到workstation的上样台中
注意大镊子的尖端不要从液面下拿出来!
左手把50ml离心管放回保温杯中,盖上盖子,右手用大镊子把box加到它该在的槽子里
把样品从box转移到冷冻上样杆里
预冷一把绿色镊子,夹片杆(带着夹片环),螺丝刀
用螺丝刀把box的螺丝拧松
绿镊子把样品夹出来,放到冷冻样品杆的样品槽里
夹片干把夹片环放到样品槽上,固定住样品
用镊子轻轻拨动,确定夹片环加好了
全程样品不能离开液氮
把box从上样台转移回保温杯
把shutter关上,补充液氮
上样台处的液氮在上样的时候,液氮液面不要超过样品台1cm
螺丝刀把box拧上
注意box的盖子把剩余样品都能盖住,别让其他样品漏出来
预冷一个大镊子,把box快速放回50ml离心管中
尖端全程不能离开液氮
注意事项
1. 上样时全程戴口罩,避免呼吸产生的水蒸气在液氮中结晶造成污染
2. 上样过程中所有工具使用前确保是完全干燥的
3. 由液氮罐倒出来的液氮严禁倒回液氮罐
4. 冷冻样品杆的shutter:shutter向前推关闭,样品被铜片保护起来。Shutter向后推打开,样品暴露。在上样和下样的过程中,shutter要关闭,避免样品掉到电镜里面去。
插冷冻样品杆
把workstation和样品杆转移到电镜前
workstation盖上盖子
注意盖子上的两个通气孔是松的,只能正着放
把一个空滤纸盒放到电镜前的小桌子上
转移workstation和样品杆到电镜前的小桌子上
注意端过来的过程中也要左低右高,避免液氮倒流
workstation上放一张滤纸,避免毛巾的毛毛掉进去;再铺上一个毛巾进行保温
插冷冻样品杆
点击电镜面板上的Load Sample
选择Cryo Instructions模式
点一下Tilt to -55°
把DIY的白色塞子塞到shutter后面,避免冷冻样品杆碰到什么东西shutter打开,样品掉到电镜里
取下杜瓦罐的盖子
右手牢牢贴在杜瓦罐上,左手按住杆子后部,把冷冻样品杆拔出来
注意workstation的提手一定要放平,否则会阻碍取冷冻样品杆
把Pin和黑线对齐(处于水平状态,此时液氮会留出来,没关系),把冷冻样品杆平稳地送进去
手臂抬高一点,保证样品杆平行送进去
赶紧把堵头插到workstation上,防止液氮流出
等抽真空,如果一分半还没有警报,那就说明没有漏气
左手先扶着,右手点面板上的Tilt to 0°,左右手一起扶着杜瓦罐,等台面不转了,把杜瓦罐转正,在吸力作用下平稳送进去
左手一定要托住样品杆,不能给其向下的力
在杜瓦罐中加液氮,导出多余液氮,把塞子放上去,shutter后的白色塞子拿下来
点Done
软件操作
准备工作
检查仪器状态是否正常
真空状态:All Vacuum(Closed)
真空值:1-10
真空颜色:浅蓝绿色
正常荧光屏状态:Screen is inserted
阀门:黄底黑字
放大倍数:4300X
坐标状态:X/Y/Z:0.00um
相机冷却状态:Cete Contig: Stable
Low Dose:关闭状态
模式选择:在FEG register里面选择Cryo-TEM模式,点Set
Cryo Box处于inserted状态
冷阱加液氮
Empty Buffer
如果是今天第一人做实验,或者前面有三四个小时没人用仪器,就要做Empty Buffer
做Empty Buffer的时候,不能插入样品杆或者堵头
Empty Buffer只要不是灰底黑字,就是在运行中
成像
开阀门
当真空值≤20,打开样品杆shutter,真空值会回弹,等其重新到10了再开阀门
低倍找样品
挑选合适Square
放大倍数WieLM115/155 x
检查冰层:灰色的为冰层,纯白色说明此处冰层破裂
大而亮的孔为薄区,小而暗的孔为厚区
挑选合适的Square
粗调焦
打开Low Dose,选择Search模块
放大倍数在SA2600-4300x之间,可自行调整
打开物镜光阑
70即可
用Wobbler调焦距
Search面板中,Control模块下,点亮Wobbler,角度为5°,调整在 hight,使样品台的晃动最小
调节束流值
≤0.5nA,一般为0.3nA
高倍精调焦
切换到Exposure模块
依次点击Blank,Exposure
等Blank变成黄底黑字就切换好了
先点R1放下荧光屏,点Blank打开光路,此时屏幕出现图像
确认所需放大倍数
根据样品确定自己的放大倍数,一般为28000-45000x
注意,先拍低倍再拍高倍
调节束流
找到有样品的孔,把视野挪到有碳膜边缘的位置
调节束流值为能看到样品的最小值
一般为0.3nA
一定要小于1nA
如果光路歪了,用轨迹球调光路
精细调焦
用R1抬屏,点CCD中的Search,在CCD上去对焦
用旋钮调节到正焦(图像最模糊),然后点R2进行数值归零
给一个欠焦值
逆时针旋转旋钮,直到能清晰看到样品
记录欠焦值,同一个样品的欠焦值都差不多
拍照,确认一下自己的焦距调的怎么样
点Acquire
拍完照马上点Blank(或R3)关闭电子束保护样品
端详照片,如果欠焦太过,直接顺时针旋转旋钮,如果欠焦不够,逆时针旋转旋钮
点击Blank打开光路,再拍一张看看,直到满意
拍照
换个地方正儿八经拍照
点Search,回到Low Dose的Search模块
把视野挪到别的地点
返回Exposure模块
依次点击Blank,Exposure
等Blank变成黄底黑字就切换好了
点Blank打开光路,点Acquire拍照,拍好后点R3关闭电子束,保护样品
换视野
换个地方
回到Search模块
把视野挪到别的地方
返回Exposure模块
依次点击Blank,Exposure
等Blank变成黄底黑字就切换好了
点Blank打开光路,点Acquire拍照,拍好后点R3关闭电子束,保护样品
调放大倍数(此处调的是拍照时的放大倍数,即Exposure模块的放大倍数)
在Exposure模块下
R1放下荧光屏
Blank打开光路
调节放大倍数,注意束流值≤0.3nA
再次调焦
R1抬屏
此时焦距差不多ok,直接微调一下即可
拍照
点Acquire
拍完照马上点Blank(或R3)关闭电子束
换个孔
退出Low Dose
关闭物镜光阑
关闭Low Dose
确认一下Screen is inserted
找别的孔
粗重新调焦
精细调焦
拍照
特殊操作
如果样品耐辐射,可以在Low Dose的Exposure模块下,在调好焦的状态下直接点Search,换位置,拍不同的样品。
动作要快
改Integration Time
一般为2s,每次都要重新修改
在低倍下,Exposure模块下,调节Integration time
0.5~1s可以用来筛样,牺牲了对比度,但是减少了对样品的损坏
结束操作
各种归零
先回到Low Dose的Search模块
退出物镜光阑
Holder归零,删除轨迹
先点Eucentric Focus进行机械归零,再点R2进行数值归零
放大倍数调回4300X
退出CCD camera
把Blank取消,即打开光路
关闭阀门
关于Low Dose
此时不关Low Dose,在下次上样后操作前,把Low Dose关了
拔冷冻样品杆
准备
先在workstation里面加入液氮
关shutter
拔冷冻样品杆
电镜面板上点Remove Sample
把杜瓦罐盖子取下来
左右手牢牢抓住杜瓦罐,平行地平稳地向外拔,拔到拔不动
右手给一个初始的转动的力,顺时针转动杜瓦罐,右手拿开
左手撩着杜瓦罐转动,转到底
左手不要松,右手上去,把冷冻样品杆拔出来
左手给一个托着的力
把workstation的塞子拔出来,冷冻样品杆塞进去
注意workstation的提手一定要放平,否则会阻碍放冷冻样品杆
更换样品
准备
先在workstation里补充液氮
把workstation和冷冻样品杆转移到操作台上
换样
把box从保温杯中转移到上样台上
把原有样品夹走
加走旧样品的小绿镊子不用预冷
把样品从box转移到冷冻上样杆里
把box从上样台转移回保温杯
插冷冻样品杆
看样拍照
拔冷冻样品杆
结束操作
Warm Up
前期准备
在workstation里面还有液氮的时候,把shutter打开,取出样品,再把shutter关了
把夹片环取出,放到离心管中妥善保存
把杜瓦罐里的液氮倒了
不要碰到冷冻样品杆上的pin
真空仪:
依次把V1,V2旋钮旋平,把右边水平的塞子拔下来
把冷冻样品杆插到真空仪里
不要碰到冷冻样品杆上的pin
V1拧竖直,再拧水平,V2拧竖直,缓慢再把V1拧成竖直
注意动作要缓慢,不要让指针波动太大
把温控线插到冷冻样品杆上,温控线上的红点对着液氮罐上的红点
逆时针旋转,把液氮罐头朝下倒过来
温控仪:
当真空泵的指针>10的-5次方之后,点击面板上的select holder——connect——start
一般为20min,倒计时开始即为warm up开始。当保持20min不动,则warm up结束——点stop
如果你是当天最后一个人,做完Warm Up,在做Bake Out
Bake Out (沸石循环)
真空仪
把液氮罐头朝上正过来
把真空仪上的透明管子拔下来,塞到液氮罐上
把真空仪上的黑色旋钮逆时针打开,旋到旋不动,再顺时针回旋一圈
温控仪
点击面板上的Mode——bake out——设置温度(100℃)和时间(2:00:00)
点Apply——Back——Back——Start
把液氮罐上的黑色旋钮逆时针旋开,旋到底,再顺时针回旋一圈
平时为2h,周末一般为12h(需要提前和颜老师确认)
其他操作
1. 烤片机要关闭并拔掉电源
2. 做Cryo Cycle
先把冷阱中的液氮倒空
计算一下此时到第二天早上七点的剩余时间,输入时长,按enter键开始
3. 把上样台,夹片环,绿色镊子,夹片杆,堵头等放入干燥柜中,收拾台面,归整物品
漏气处理方式
点开Tales Vacuum Overview软件
看TMP模块,speed在60%以上就停止了,是小漏气;低于60%,是大漏气
深蓝色:漏气中
黄色:stop
橙色:抽真空中
绿色:真空值为100%,正常工作状态
当TMP为绿色,speed为100%,且Column≤28时,点击Evacuate All
IGPco模块变橙色,开始抽真空;此时Column会跳高一些,然后再往下降
当真空值小于等于20的时候,即恢复正常